CRISPR (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) ເປັນເຕັກນິກການແກ້ໄຂຈີໂນມລຸ້ນທີສາມທີ່ໄດ້ປະຕິວັດໂລກດ້ວຍຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຄວາມໄວສູງ. ມັນໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອປິ່ນປົວພະຍາດທາງຊີວະວິທະຍາ ແລະ ການຕິດເຊື້ອຕ່າງໆ. ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຕ່າງໆ ແລະ ໂປຣແຄຣີໂອດອື່ນໆ (ເຊັ່ນ archaea) ຍັງມີລະບົບ CRISPR/Cas9 ເພື່ອປ້ອງກັນຈາກຟາຈ. ມີລາຍງານວ່າຍຸດທະສາດທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ສາມາດຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕ ແລະ ຄວາມຄືບໜ້າຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມ triple negative (TNBC) ໂດຍການເປົ້າໝາຍຍີນຕ້ານທານທີ່ອາດຈະປ່ຽນແປງ, ການຖອດລະຫັດ, ແລະ ການຄວບຄຸມ epigenetic. ການແຊກແຊງການປິ່ນປົວເຫຼົ່ານີ້ອາດຈະຊ່ວຍແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ທ້າທາຍເຊັ່ນ: ການຕ້ານທານຢາທີ່ສັງເກດເຫັນເຖິງແມ່ນວ່າໃນ TNBC. ປະຈຸບັນ, ມີວິທີການຕ່າງໆເພື່ອສົ່ງ CRISPR/Cas9 ໄປຫາຈຸລັງເປົ້າໝາຍ, ເຊັ່ນ: ທາງດ້ານຮ່າງກາຍ (microinjection, electroporation ແລະ hydrodynamic modes), ໄວຣັດ (adeno-associated virus ແລະ lentivirus) ແລະ ບໍ່ແມ່ນໄວຣັດ (liposomes ແລະ lipid nanoparticles). ເຖິງແມ່ນວ່າຮູບແບບຕ່າງໆໄດ້ຖືກພັດທະນາຂຶ້ນເພື່ອສຶກສາສາເຫດທາງໂມເລກຸນຂອງ TNBC, ແຕ່ການຂາດວິທີການທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວ ແລະ ເປົ້າໝາຍສຳລັບການສົ່ງເຄື່ອງມືແກ້ໄຂຈີໂນມໃນຮ່າງກາຍຈຳກັດການນຳໃຊ້ທາງດ້ານຄລີນິກຂອງພວກມັນ. ໂດຍສະຫຼຸບແລ້ວ, ບົດວິຈານນີ້ກວດສອບຢ່າງລະອຽດກ່ຽວກັບຄວາມຄືບໜ້າ, ສິ່ງທ້າທາຍ, ຂໍ້ຈຳກັດ ແລະ ຄວາມສົດໃສດ້ານຂອງການປິ່ນປົວດ້ວຍ CRISPR/Cas9 ສຳລັບ TNBC ໂດຍອີງໃສ່ຫຼັກຖານທີ່ມີຢູ່. ພວກເຮົາຍັງໄດ້ເນັ້ນໃຫ້ເຫັນວ່າການປະສົມປະສານຂອງປັນຍາປະດິດ ແລະ ການຮຽນຮູ້ຂອງເຄື່ອງຈັກສາມາດປັບປຸງຍຸດທະສາດ CRISPR/Cas9 ໃນການປິ່ນປົວ TNBC ໄດ້ແນວໃດ.
ມະເຮັງມີລັກສະນະໂດຍການແບ່ງຈຸລັງທີ່ບໍ່ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້, ການລົບກວນຈຸດກວດສອບວົງຈອນຂອງຈຸລັງ, ແລະການກາຍພັນໃນພັນທຸກໍາສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກ (TSGs) (Matthews et al., 2022). ໃນບັນດາມະເຮັງປະເພດຕ່າງໆ, ມະເຮັງເຕົ້ານົມແມ່ນມະເຮັງທີ່ພົບເລື້ອຍທີ່ສຸດໃນແມ່ຍິງ ແລະ ມີອັດຕາການຕາຍສູງໃນທົ່ວໂລກ (Waks and Winer, 2019). ມະເຮັງເຕົ້ານົມເປັນພະຍາດທີ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງກັນທີ່ມີລັກສະນະຫຼາກຫຼາຍ, ເຊັ່ນ: ລັກສະນະທາງດ້ານເນື້ອເຍື່ອ ແລະ ຊີວະວິທະຍາ, ການນຳສະເໜີ ແລະ ພຶດຕິກຳທາງດ້ານຄລີນິກ, ແລະ ການຕອບສະໜອງຕໍ່ການປິ່ນປົວ (Weigelt et al., 2010). ການຈັດປະເພດມະເຮັງເຕົ້ານົມໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈທີ່ຊັດເຈນສຳລັບການວິນິດໄສມະເຮັງເຕົ້ານົມ ແລະ ການພະຍາກອນເນື້ອງອກ. ການນໍາໃຊ້ຕົວຊີ້ວັດທາງຊີວະພາບທົ່ວໄປ ແລະ ລັກສະນະທາງດ້ານຄລີນິກແມ່ນເງື່ອນໄຂຫຼັກສຳລັບການຈັດປະເພດມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Tsang and Tse, 2019). ການພະຍາກອນ ແລະ ການຕອບສະໜອງຕໍ່ການປິ່ນປົວມະເຮັງເຕົ້ານົມແມ່ນໄດ້ຮັບອິດທິພົນຈາກຫຼາຍປັດໃຈ, ລວມທັງການມີຕົວຮັບ estrogen (ER), ຕົວຮັບ progesterone (PR), ຕົວຮັບປັດໄຈການເຕີບໂຕຂອງຜິວໜັງຂອງມະນຸດ 2 (HER2/neu), ແລະ ລະດັບເນື້ອເຍື່ອ, ປະເພດຂອງເນື້ອງອກ, ແລະ ລະດັບ. ຂະໜາດ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງຕ່ອມນ້ຳເຫຼືອງ (Al-Tubaiti, 2020). ໄດ້ມີການລະບຸຊະນິດຍ່ອຍທາງໂມເລກຸນພາຍໃນຫ້າຊະນິດຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມ, ລວມທັງ luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like, ແລະ claudin-low (Prat et al., 2015). TNBC ເປັນຊະນິດຍ່ອຍທາງໂມເລກຸນຂອງມະເຮັງທີ່ບໍ່ໄດ້ສະແດງອອກທັງໝົດຂອງ ER, PR, ແລະ HER2 (Yin et al., 2020). ລັກສະນະທາງດ້ານພະຍາດເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບ TNBC, ເຊິ່ງຢືນຢັນຄວາມຄືບໜ້າຢ່າງໄວວາ ແລະ ມີລັກສະນະຮຸນແຮງກວ່າມະເຮັງເຕົ້ານົມຊະນິດອື່ນໆ (Feng et al., 2018). ນອກຈາກນັ້ນ, Peru et al (2000) ໄດ້ໃຊ້ເທັກໂນໂລຢີ microarray ເພື່ອຈັດປະເພດມະເຮັງເຕົ້ານົມຄືນໃໝ່ ແລະ ລະບຸຊະນິດຍ່ອຍທາງໂມເລກຸນພາຍໃນຫ້າຊະນິດຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Cadenas, 2012). ມະເຮັງເຕົ້ານົມແບບ basal-like ແມ່ນຊະນິດຍ່ອຍຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມທີ່ມີ phenotype triple-negative ແລະ ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມຄືບໜ້າຢ່າງໄວວາ. ຄວນສັງເກດວ່າມະເຮັງເຕົ້ານົມທີ່ຄ້າຍຄືກ້ອນເນື້ອທັງໝົດມັກຈະຖືກວິນິດໄສຜິດວ່າເປັນ TNBC, ແຕ່ມີພຽງ 77% ເທົ່ານັ້ນທີ່ເປັນ TNBC; ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, 71–91% ຂອງ TNBC ແມ່ນຄ້າຍຄືກ້ອນເນື້ອ, ຊີ້ບອກວ່າມະເຮັງເຕົ້ານົມສອງປະເພດນີ້ຊ້ອນກັນ ແລະ ເປັນຕົວແທນຂອງການຈັດປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (Wang D.-Y. et al., 2019). ສິ່ງນີ້ສ້າງຄວາມຕ້ອງການທີ່ຈະອະທິບາຍຄວາມແຕກຕ່າງຂອງ TNBC ເພື່ອອະທິບາຍການຄາດຄະເນ ແລະ ກຳນົດການຕອບສະໜອງທີ່ອາດເກີດຂຶ້ນຕໍ່ການປິ່ນປົວໃນປະຈຸບັນ ແລະ ໃນອະນາຄົດ. ນອກຈາກນັ້ນ, TNBC ກວມເອົາ 15–20% ຂອງກໍລະນີມະເຮັງເຕົ້ານົມທັງໝົດ ແລະ ພົບຫຼາຍໃນແມ່ຍິງທີ່ມີອາຍຸຕ່ຳກວ່າ 50 ປີ. ການກາຍພັນ BRCA1 ຫຼື BRCA2 ໄດ້ຖືກລາຍງານໃນປະມານ 20% ຂອງກໍລະນີ TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017). , 2020). ການສຶກສາຍັງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ TNBC ມີສະພາບແວດລ້ອມພູມຕ້ານທານທີ່ແຕກຕ່າງກັນເຊິ່ງປະກອບມີລະດັບສູງຂອງປັດໄຈການເຕີບໂຕຂອງ endothelial vascular, macrophages ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອງອກ (TAMs), lymphocytes ທີ່ແຊກຊຶມເຂົ້າໄປໃນເນື້ອງອກ (TILs), ແລະໂມເລກຸນອື່ນໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເຕີບໂຕແລະການເຄື່ອນຍ້າຍຂອງເນື້ອງອກ. ດັ່ງນັ້ນ, ການເຂົ້າໃຈສະພາບແວດລ້ອມພູມຕ້ານທານຂອງ TNBC ແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍຕໍ່ການຄາດຄະເນແລະການປິ່ນປົວຂອງມັນ (Fan ແລະ He, 2022).
ເພື່ອປະເມີນການຄາດຄະເນຂອງ TNBC ແລະຮັບປະກັນການປິ່ນປົວທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ການວິນິດໄສທີ່ຖືກຕ້ອງ, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນອີງໃສ່ immunohistochemistry (IHC) ເພື່ອກວດຫາ ER, PR ແລະ HER2, ແລະ mammography ເພື່ອກວດຫາເນື້ອງອກເຕົ້ານົມ, ແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, mammography ບໍ່ສາມາດສະແດງລັກສະນະພາຍໃນເນື້ອງອກໄດ້ຢ່າງພຽງພໍເຊັ່ນ: necrosis ແລະ fibrosis (Deepak Singh et al., 2021). ເນື່ອງຈາກການຄາດຄະເນ ແລະ ການວິນິດໄສທີ່ບໍ່ດີປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ແພດສັ່ງຢາທີ່ຖືກຕ້ອງ (Chaudhary, 2020), ຍຸດທະສາດຕ່າງໆຈຶ່ງຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອປັບປຸງການດູແລຄົນເຈັບທີ່ມີ TNBC. ປະຈຸບັນ, ຢາສອງຊະນິດຄື doxorubicin ແລະ cyclophosphamide ຖືກນຳໃຊ້ໃນຄົນເຈັບທີ່ມີ TNBC ແລະ ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີ. ນອກຈາກນັ້ນ, ຢາ platinum ອື່ນໆກໍ່ຖືກນຳໃຊ້, ເຊັ່ນ carboplatin ແລະ cisplatin (Sikov et al., 2015). ນອກຈາກນັ້ນ, ຕົວຍັບຍັ້ງ PARP ເຊັ່ນ Olaparib, Velaparib, ແລະ PF-01367338 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຢາເຄມີບຳບັດທີ່ມີທ່າແຮງສໍາລັບການປິ່ນປົວ TNBC (Ishino et al., 2018). ເນື່ອງຈາກເສັ້ນທາງສັນຍານ Wnt/b-Catenin, NOTCH, ແລະ Hedgehog ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າມີສ່ວນຮ່ວມໃນການເກີດຂຶ້ນ ແລະ ຄວາມຄືບໜ້າຂອງ TNBC, ການແນໃສ່ຢາໄປສູ່ເສັ້ນທາງເຫຼົ່ານີ້ອາດເປັນຍຸດທະສາດທີ່ສຳຄັນ (Aysola et al., 2013). ເຖິງແມ່ນວ່າການຜ່າຕັດ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍລັງສີ ແລະ ການປິ່ນປົວດ້ວຍທາງເຄມີຍັງຄົງເປັນການປິ່ນປົວຫຼັກສຳລັບ TNBC ໃນປະຈຸບັນ, ແຕ່ມີຄວາມຄືບໜ້າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການພັດທະນາວິທີການປິ່ນປົວໃໝ່ລວມທັງການປິ່ນປົວແບບເປົ້າໝາຍ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານ, ເຄື່ອງມືແກ້ໄຂພັນທຸກຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ CRISPR ເຊັ່ນ Cas9n, dCas9, CRISPR/Cas12, ການແກ້ໄຂຕົ້ນຕໍ, ແລະ ການປິ່ນປົວດ້ວຍພັນທຸກຳເປົ້າໝາຍ CRISPR/Cas9. ໃນທີ່ນີ້ພວກເຮົາຈະສຸມໃສ່ເຄື່ອງມືແກ້ໄຂພັນທຸກຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ CRISPR ຕ່າງໆທີ່ໃຊ້ໃນການປິ່ນປົວ TNBC. ໃນນັ້ນ, CRISPR/Cas9 ໄດ້ຮັບຄວາມສົນໃຈຢ່າງກວ້າງຂວາງ.
Cas9n, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ Cas9 nickase, ແມ່ນໂປຣຕີນ Cas9 ທີ່ຖືກວິສະວະກຳທາງພັນທຸກຳທີ່ມາຈາກລະບົບແກ້ໄຂຈີໂນມ CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019). ໃນຮູບແບບເດີມຂອງມັນ, ໂປຣຕີນ Cas9 ປະກອບດ້ວຍສອງໂດເມນນິວເຄລຍສຄື: RuvC ແລະ HNH, ເຊິ່ງໜ້າທີ່ຫຼັກແມ່ນການແຍກສາຍ DNA ທັງສອງ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນ Cas9n, ໜຶ່ງໃນໂດເມນນິວເຄລຍສ, HNH, ມີການກາຍພັນທາງພັນທຸກຳ ແລະ ກາຍເປັນບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ. ດັ່ງນັ້ນ, ໂດເມນ HNH ຂອງ Cas9n ຍັງຄົງບໍ່ເຮັດວຽກ. ມີພຽງໂດເມນ RuvC ເທົ່ານັ້ນທີ່ຍັງຄົງເຄື່ອນໄຫວ, ຊ່ວຍໃຫ້ Cas9n ສາມາດຕັດ ຫຼື ສ້າງການແຕກແຍກໃນສາຍ DNA ດຽວ (Trevino ແລະ Zhang, 2014). ເມື່ອປຽບທຽບກັບ Cas9, Cas9n ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບນອກເປົ້າໝາຍໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ ແລະ ປັບປຸງກົນໄກການສ້ອມແປງຈຸລັງໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງ. Cas9n ສາມາດໃຊ້ເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫາຕ່າງໆ, ເຊັ່ນ: ການສ້າງການແຕກແຍກຢູ່ສະຖານທີ່ສະເພາະໃນ DNA ສອງສາຍ. ສຳລັບຈຸດປະສົງນີ້, ໂມເລກຸນ Cas9n ສອງໂມເລກຸນໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັນ ແລະ ນຳໃຊ້ຮ່ວມກັນ (Yee, 2016). ໄຄເນສສາຍພັນປະສົມ 3 (MLK3) ແມ່ນໄຄເນສໂປຣຕີນທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍໄມໂຕເຈນເຊິ່ງເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຕົວຄວບຄຸມທີ່ສຳຄັນໃນລະຫວ່າງການແຜ່ລາມຂອງ TNBC (Cronan et al., 2012).
MLK3 ສາມາດກະຕຸ້ນເສັ້ນທາງສັນຍານຫຼາຍເສັ້ນທາງທີ່ນຳໄປສູ່ການແຜ່ກະຈາຍຂອງ TNBC. ຕົວຢ່າງ, ເສັ້ນທາງ c-Jun N-terminal kinase (JNK) ຄວບຄຸມການເຄື່ອນທີ່ຂອງຈຸລັງ ແລະ ການເສື່ອມສະພາບຂອງເມທຣິກນອກຈຸລັງ, ແລະ MLK3 ກະຕຸ້ນເສັ້ນທາງ JNK, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເສີມຂະຫຍາຍການເຄື່ອນທີ່ຂອງຈຸລັງ ແລະ ໃຫ້ຄຸນສົມບັດການຮຸກຮານ (Rattanasinchai ແລະ Gallo, 2016). MLK3 ຍັງຄວບຄຸມ EMT. ເພື່ອເຮັດສິ່ງນີ້, ມັນກະຕຸ້ນປັດໄຈການຖອດລະຫັດທາງລຸ່ມເຊັ່ນ: Snail, Slug ແລະ Twist. ປັດໄຈເຫຼົ່ານີ້ຍັບຍັ້ງການສະແດງອອກຂອງເຄື່ອງໝາຍ epithelial ແລະ ສົ່ງເສີມການສະແດງອອກຂອງເຄື່ອງໝາຍ mesenchymal, ນຳໄປສູ່ການມີຮູບແບບການແຜ່ກະຈາຍ (Casalino et al., 2023). MLK3 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າມີບົດບາດໃນການປັບປຸງ ECM ແລະ ການກະຕຸ້ນຂອງ proteases ເຊັ່ນ: matrix metalloproteinases (MMPs) ທີ່ເສື່ອມສະພາບ ECM. ສິ່ງນີ້ອຳນວຍຄວາມສະດວກໃຫ້ແກ່ການບຸກລຸກຂອງຈຸລັງເນື້ອງອກ ແລະ ແຜ່ລາມໄປສູ່ບໍລິເວນທີ່ຫ່າງໄກ (Katari et al., 2019). ດັ່ງນັ້ນ, ການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ MLK3 ມີບົດບາດສຳຄັນໃນ TNBC. ທ່ານ Rattanasinchai ແລະ Gallo ໄດ້ໃຊ້ຮູບແບບ TNBC ເພື່ອສຶກສາບົດບາດຂອງ MLK3 ແລະພົບວ່າມັນສົ່ງເສີມການພັດທະນາຂອງມະເຮັງຜ່ານເສັ້ນທາງສັນຍານສະເພາະ. ພວກເຂົາເຈົ້າໄດ້ໃຊ້ CRISPR/Cas9n ເພື່ອແກ້ໄຂ MLK3 ແລະສັງເກດເຫັນການຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການແຜ່ລາມຂອງ TNBC (Rattanasinchai ແລະ Gallo, 2016).
dCas9, ເຊິ່ງມັກຖືກເອີ້ນວ່າ Cas9 ທີ່ບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ, ແມ່ນຮູບແບບອະນຸພັນທີ່ຖືກດັດແປງຂອງໂປຣຕີນ Cas9. ບໍ່ເຫມືອນກັບ Cas9 ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ, dCas9 ຂາດກິດຈະກຳ endonuclease, ເຮັດໃຫ້ມັນບໍ່ສາມາດກະຕຸ້ນການແຕກຂອງ DNA ສອງສາຍໄດ້. ດັ່ງນັ້ນ, dCas9 ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເປົ້າໝາຍພາກພື້ນສະເພາະຂອງຈີໂນມໄດ້ຢ່າງແນ່ນອນໂດຍບໍ່ມີການປ່ຽນແປງ ຫຼື ການດັດແປງໃດໆຕໍ່ລໍາດັບ DNA (Wang et al., 2016). ໃນ dCas9, ໂປຣຕີນ endonuclease ສອງຊະນິດ, RuvC ແລະ HNH, ຖືກປິດໃຊ້ງານໂດຍການສະກັດກັ້ນກົດອະມິໂນທີ່ສຳຄັນ. (Richter et al., 2016). ເຖິງວ່າຈະຂາດກິດຈະກຳການຕັດ DNA, dCas9 ມີບົດບາດສໍາຄັນຫຼາຍຢ່າງໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງພັນທຸກໍາ ແລະ ເຕັກໂນໂລຊີຊີວະພາບ. ຕົວຢ່າງ, ມັນຊ່ວຍໃຫ້ເຫັນພາບຂອງພາກພື້ນສະເພາະຂອງຈີໂນມ, ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການຄວບຄຸມການຖອດລະຫັດ, ແລະ ສົ່ງເສີມການດັດແປງ epigenetic (Brocken et al., 2018).
ປັດໄຈການຖອດລະຫັດ ZEB1 (ການຜູກມັດ E-box ຂອງນິ້ວມືສັງກະສີ homeobox 1) ມີບົດບາດສະເພາະ ແລະ ສຳຄັນໃນການໄກ່ເກ່ຍການຫັນປ່ຽນ epithelial-mesenchymal (EMT), ຂະບວນການຂອງຈຸລັງທີ່ເກີດຂຶ້ນໃນລະຫວ່າງການພັດທະນາຂອງຕົວອ່ອນ, ການສ້ອມແປງເນື້ອເຍື່ອ, ແລະ ຄວາມຄືບໜ້າຂອງມະເຮັງ. ມັນກ່ຽວຂ້ອງກັບການຫັນປ່ຽນຂອງຈຸລັງ epithelial ໄປເປັນຈຸລັງ mesenchymal, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງຂອງຈຸລັງ, ການເຄື່ອນທີ່, ການຮຸກຮານ, ແລະອື່ນໆ (Wu et al., 2020). ZEB1 ຍັບຍັ້ງເຄື່ອງໝາຍ epithelial ຫຼາຍຊະນິດ, ເຊັ່ນ E-cadherin ແລະ Occludin, ເຊິ່ງມີຄວາມຮັບຜິດຊອບໃນການຮັກສາການຍຶດຕິດຂອງຈຸລັງ ແລະ ຂົ້ວຂອງຈຸລັງ epithelial ໃນ TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008). ນອກຈາກນັ້ນ, ZEB1 ຍັງກະຕຸ້ນຕົວຊີ້ບອກບາງຢ່າງເຊັ່ນ N-cadherin, vimentin ແລະ fibronectin (Konradi et al., 2014) ແລະຍັງຄວບຄຸມຍີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການປ່ຽນແປງໂຄງສ້າງຂອງຈຸລັງເຊັ່ນ Rho GTPases ແລະ matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). et al., 2014). 2022), ນອກຈາກນັ້ນ, ມັນຍັງມີຜົນກະທົບຕໍ່ເສັ້ນທາງສັນຍານຕ່າງໆເຊັ່ນ transforming growth factor-β (TGF-β), ສັນຍານ Wnt, ແລະອື່ນໆ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສົ່ງເສີມການບຸກລຸກຂອງເນື້ອງອກ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍໃນ TNBC (Chen et al., 2016). ການສຶກສາ ແລະ ຫຼັກຖານທາງວິທະຍາສາດຈຳນວນຫຼາຍຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ ZEB1 ມີທ່າແຮງອັນໃຫຍ່ຫຼວງໃນຖານະເປັນຕົວແທນທີ່ມີຄຸນຄ່າສຳລັບການກວດຫາ ແລະ ການແຊກແຊງການປິ່ນປົວຂອງ TNBC. ໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ, Waryah et al. ໄດ້ໃຊ້ຮູບແບບ TNBC ແລະ ບັນລຸການສະກັດກັ້ນ ZEB1 ຢ່າງຄົບຖ້ວນໂດຍ dCas9. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຂົາໄດ້ສັງເກດເຫັນຄວາມຈຳເພາະສູງຫຼາຍ ແລະ ການຍັບຍັ້ງ ZEB1 ເກືອບສົມບູນໃນສະພາບໃນຮ່າງກາຍ (Waryah et al., 2023).
CRISPR/Cas12 ເປັນເຄື່ອງມືແກ້ໄຂພັນທຸກໍາທີ່ເອີ້ນວ່າ CRISPR/Cpf1. ມັນມາຈາກລະບົບ CRISPR/Cas, ເຊິ່ງຄໍາວ່າ Cas12 ໝາຍເຖິງໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ CRISPR 12 (Bharathkumar et al., 2022), ເຊິ່ງຄ້າຍຄືກັນກັບ Cas9 ຢ່າງສິ້ນເຊີງ. ຄວາມແຕກຕ່າງພຽງແຕ່ວ່າມັນມີໂປຣຕີນ Cas12. ເມື່ອທຽບກັບ Cas9, Cas12 ມີໜ້າທີ່ພິເສດບາງຢ່າງເຊັ່ນ: ການສ້າງປາຍທີ່ໜຽວໃນລະຫວ່າງຂະບວນການແກ້ໄຂພັນທຸກໍາ, ໃນຂະນະທີ່ Cas9 ສ້າງປາຍທີ່ມົວ (Wang et al., 2021). ຄຸນສົມບັດນີ້ຂອງ Cas12 ປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນເຕັກໂນໂລຊີການຈັດການ DNA ສະເພາະຂອງມັນ. ໃນຖານະເປັນໂປຣຕີນທີ່ສາມາດຮັບຮູ້ ແລະ ຕັດ DNA ເປົ້າໝາຍໄດ້ຢ່າງແນ່ນອນ, ມັນມີຄວາມຄ່ອງແຄ້ວທີ່ແຕກຕ່າງ, ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນເຄື່ອງມືທີ່ມີປະສິດທິພາບສໍາລັບການນໍາໃຊ້ທີ່ຫຼາກຫຼາຍ, ລວມທັງການແກ້ໄຂພັນທຸກໍາ (Pickar-Oliver ແລະ Gersbach, 2019).
ຄ້າຍຄືກັນກັບ CRISPR variants ອື່ນໆ, CRISPR/Cas12 ຍັງມີຄວາມສາມາດໃນການລົບລ້າງ ຫຼື ກະຕຸ້ນ gene ໃນ TNBC, ໂດຍແນໃສ່ gene ທີ່ມີບົດບາດສຳຄັນໃນການເກີດພະຍາດ ຫຼື ການຕອບສະໜອງຕໍ່ການປິ່ນປົວ (Yang ແລະ Zhang, 2023). ເພື່ອເຮັດສຳເລັດຂະບວນການນີ້, RNA ນຳພາ (gRNA) ໄດ້ຖືກພັດທະນາຂຶ້ນເພື່ອຊີ້ນຳ Cas12 ໄປຫາ gene ເປົ້າໝາຍ. ເມື່ອ Cas12 ຜູກມັດກັບເປົ້າໝາຍຂອງມັນ, ມັນຈະນຳສະເໜີການແຕກຂອງສອງສາຍໃນ DNA ແລະ ກະຕຸ້ນກົນໄກການສ້ອມແປງ DNA. ໃນລະຫວ່າງຂະບວນການສ້ອມແປງ, ນິວຄລີໂອໄທດ໌ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງອາດຈະຖືກລວມເຂົ້າ, ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການກາຍພັນຂອງ gene ແລະ ການສູນເສຍໜ້າທີ່ (Zhang et al., 2021a). ນອກຈາກນັ້ນ, ເອນໄຊ Cas12 ລຸ້ນທີ່ໄດ້ຮັບການປັບປຸງ (ເອີ້ນວ່າ dCas12) ຍັງຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກະຕຸ້ນ gene. ໂດຍການລວມມັນກັບຕົວກະຕຸ້ນການຖອດລະຫັດ, ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະກະຕຸ້ນ gene ບາງຊະນິດ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງກະຕຸ້ນພວກມັນ. ເທັກໂນໂລຢີນີ້ມີທ່າແຮງອັນໃຫຍ່ຫຼວງໃນການສົ່ງເສີມການກະຕຸ້ນຂອງ gene ສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກ (Sultan et al., 2022).
ການແກ້ໄຂແບບ Prime ແມ່ນເທັກໂນໂລຢີການແກ້ໄຂຈີໂນມທີ່ພັດທະນາຂຶ້ນໃໝ່ ແລະ ດີກວ່າຫຼາຍ. ມັນສາມາດດັດແປງ DNA ຂອງສິ່ງມີຊີວິດໄດ້ຢ່າງແມ່ນຍຳ (Chen ແລະ Liu, 2023). ການແກ້ໄຂແບບ Prime ແມ່ນບັນລຸໄດ້ໂດຍຜ່ານການປະສົມປະສານຂອງສອງອົງປະກອບຫຼັກຄື: ເອນໄຊ CRISPR/Cas9 ທີ່ຖືກດັດແປງ ແລະ reverse transcriptase. ບົດບາດຂອງເອນໄຊ CRISPR/Cas9 ແມ່ນເພື່ອເລືອກເປົ້າໝາຍສະຖານທີ່ທີ່ແນ່ນອນໃນຈີໂນມ, ໃນຂະນະທີ່ reverse transcriptase ຊ່ວຍດັດແປງ DNA ຢ່າງລະອຽດຢູ່ສະຖານທີ່ເປົ້າໝາຍ (Hassan et al., 2021). ໃນກົນໄກການແກ້ໄຂແບບ primer, ຂັ້ນຕອນທຳອິດກ່ຽວຂ້ອງກັບການສ້າງ RNA ຄູ່ມືການແກ້ໄຂແບບ primer (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021). ມັນປະກອບດ້ວຍລຳດັບເປົ້າໝາຍ ແລະ ແມ່ແບບ RNA ທີ່ສອດຄ້ອງກັບສະຖານທີ່ແກ້ໄຂທີ່ຕ້ອງການໃນ DNA ເປົ້າໝາຍ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ pegRNA ຈະຖືກນຳເຂົ້າສູ່ຈຸລັງເປົ້າໝາຍພ້ອມກັບ nuclease ການແກ້ໄຂແບບ primer (PE2). PE2 ແມ່ນໂປຣຕີນປະສົມທີ່ປະກອບດ້ວຍເອນໄຊ Cas9, reverse transcriptase, ແລະ ຕົວປັບການແກ້ໄຂແບບ primer (Martín-Alonso et al., 2021). ພາຍໃນເຊວ, pegRNA ແລະສະລັບສັບຊ້ອນ PE2 ຄົ້ນຫາ DNA ສະເພາະທີ່ພວກມັນຕ້ອງການດັດແປງ. ເອນໄຊມ Cas9 ຕັດ DNA ແລະສ້າງແມ່ແບບທີ່ປະກອບດ້ວຍສາຍດ່ຽວ (Choi et al., 2022). Reverse transcriptase ໃຊ້ແມ່ແບບນີ້ເພື່ອກະກຽມ DNA ສຳລັບການແກ້ໄຂ. ພ້ອມກັບການຄັດລອກ DNA, ຄຳແນະນຳສຳລັບການແກ້ໄຂແມ່ແບບ RNA ກໍ່ຖືກລວມເຂົ້ານຳ. ສຸດທ້າຍ, ສາຍ DNA ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໃໝ່ແມ່ນໃຊ້ເປັນແມ່ແບບເພື່ອສ້ອມແປງການແຕກຫັກໃນ DNA, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ລຳດັບ DNA ປ່ຽນແປງທີ່ມີການດັດແປງທີ່ຕ້ອງການ (Ochoa-Sanchez et al., 2021). ກົນໄກການແກ້ໄຂ primer ສາມາດນຳໄປສູ່ການກາຍພັນຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນ gene. ມັນສາມາດແນໃສ່ການກາຍພັນຈຸດ, ການແຊກ, ການລຶບ, ແລະແມ້ກະທັ້ງການທົດແທນ gene (Anzalone et al., 2019; Chen ແລະ Liu, 2023). ການແກ້ໄຂ prime ສະເໜີຂໍ້ໄດ້ປຽບຫຼາຍຢ່າງທຽບກັບເຕັກໂນໂລຊີການແກ້ໄຂ genome ກ່ອນໜ້ານີ້. ສິ່ງເຫຼົ່ານີ້ລວມມີຄວາມແມ່ນຍຳທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ, ຜົນກະທົບນອກເປົ້າໝາຍທີ່ຫຼຸດລົງ, ແລະຄວາມສາມາດໃນການແກ້ໄຂ DNA ໂດຍບໍ່ຕ້ອງອາໄສການແຕກຫັກສອງສາຍຂອງ DNA (Anzalone et al., 2020).
ເທັກໂນໂລຢີ CRISPR/Cas9 ໄດ້ຖືກພັດທະນາຂຶ້ນໃນເບື້ອງຕົ້ນເພື່ອປົກປ້ອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຈາກການໂອນ plasmid ແລະການຕິດເຊື້ອ phage ແລະຕໍ່ມາໄດ້ຖືກນຳມາໃຊ້ໃໝ່ເປັນເຄື່ອງມືເປົ້າໝາຍ DNA ທີ່ອີງໃສ່ RNA ທີ່ມີປະສິດທິພາບສຳລັບການແກ້ໄຂ genome (Jiang ແລະ Doudna, 2017). ນອກຈາກນັ້ນ, ລະບົບ CRISPR/Cas9 ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າມີຢູ່ໃນ 50% ແລະ 87% ຂອງ genomes ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ ແລະ archaeal ຕາມລຳດັບ (Ishino et al., 2018). CRISPR/Cas9 ເປັນເຄື່ອງມືທີ່ມີທ່າແຮງສຳລັບການລຶບ, ການແຊກ ແລະ ການແກ້ໄຂລຳດັບພັນທຸກຳທີ່ຜິດປົກກະຕິໂດຍໃຊ້ຮູບແບບໃນຮ່າງກາຍ ແລະ ໃນຫຼອດທົດລອງ (Sabit et al., 2021). ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, CRISPR/Cas9 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເປັນສ່ວນໜຶ່ງຂອງລະບົບພູມຕ້ານທານແບບປັບຕົວເນື່ອງຈາກຄວາມຈຳເພາະຂອງມັນສຳລັບ genes ເປົ້າໝາຍທີ່ສົນໃຈ (Chen ແລະ Zhang, 2018).
CRISPR/Cas9 ປະກອບດ້ວຍ Cas9 ແລະ RNA ນຳພາດຽວ (sgRNA). Cas9 ເປັນ endonuclease ທີ່ປະກອບດ້ວຍສ່ວນປະກອບຂອງໂປຣຕີນຫຼາຍຊະນິດ. ນອກຈາກນັ້ນ, Cas9 ຍັງມີຄຸນສົມບັດທາງດ້ານໂຄງສ້າງ ແລະ ຮູບຮ່າງທີ່ເປັນເອກະລັກ (Pacesa et al., 2022) ຍ້ອນວ່າມັນປະກອບດ້ວຍສອງ lobes: ການຮັບຮູ້ (REC) ແລະ nuclease (NUC). REC lobe ແບ່ງອອກເປັນສາມພາກພື້ນຄື: REC1, REC2, ແລະ bridge helices (Cromwell et al., 2018). NUC ປະກອບດ້ວຍສາມ lobes, ຄື RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH ແລະໂດເມນການພົວພັນ protospacer adjacent motif (PAM) (ຮູບທີ 1) (Song et al., 2016). sgRNA ປະກອບດ້ວຍສອງອົງປະກອບ, ລວມທັງ CRISPR RNA (crRNA) ແລະ transcoding small RNA (tracer RNA) (ຮູບທີ 1). sgRNA ເຊື່ອມຕໍ່ໂປຣຕີນ Cas9 ກັບ connexins ເພື່ອສ້າງເປັນສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າສະລັບສັບຊ້ອນ effector (Richter et al., 2012). crRNA ແມ່ນຄູ່ພື້ນຖານນິວຄລີໂອໄທດ໌ 18–20 ຄູ່ທີ່ມີບົດບາດສຳຄັນໃນການຮັບຮູ້ລຳດັບ DNA ເປົ້າໝາຍ. ນອກຈາກນັ້ນ, crRNA ຈັບຄູ່ກັບ DNA ເປົ້າໝາຍ, ແລະ tracrRNA ເຮັດໜ້າທີ່ເປັນໂຄງສ້າງສຳລັບ nuclease Cas9 ເພື່ອຜູກມັດ DNA ເປົ້າໝາຍ (Manghwar et al., 2019). ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ລຳດັບ PAM ມີນິວຄລີໂອໄທດ໌ 3 ອັນ, ເຊິ່ງຢືນຢັນ, ລະບຸ ແລະ ເປັນສື່ກາງໃນການຜູກມັດຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ effector ກັບ DNA. ໜ່ວຍຍ່ອຍຂອງສະລັບສັບຊ້ອນໂປຣຕີນ Cas9 RuvC ແລະ HNH ມີກິດຈະກຳ catalytic (Richter et al., 2012; Asmamaw ແລະ Zawdie, 2021). ໂດເມນນິວຄລີໂອໄທດ໌ HNH ຂອງໜ່ວຍຍ່ອຍ Cas9 ຕັດສາຍ DNA ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ crRNA. ໂດເມນນິວຄລີເອສ RuvC ຈະຕັດສາຍ DNA ອື່ນໆ ແລະ ສ້າງການແຕກຂອງສາຍສອງເສັ້ນ (DSBs), ຫຼັງຈາກນັ້ນກົນໄກການສ້ອມແປງການແຕກຂອງ DNA ສອງແບບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈະຖືກກະຕຸ້ນ (Jiang ແລະ Doudna, 2017) (ຮູບທີ 1).
ຮູບທີ 1. ພາບລວມຂອງ CRISPR/Cas9 (A). ອົງປະກອບຂອງລະບົບ CRISPR/Cas9: (i). Cas9 endonuclease ຮັບຜິດຊອບໃນການຕັດລຳດັບ DNA ເປົ້າໝາຍ, (ii) RNA ຄູ່ມືດຽວ (sg) ທີ່ເກີດຈາກການລວມຕົວຂອງ crRNA ແລະ tra-crRNA chimeras. (ສອງ). Cas9 ປະກອບມີອົງປະກອບຫຼາຍຢ່າງເຊັ່ນ: Rec I, Rec II, NUC lobe (HNH ແລະ Ruv C ແມ່ນອົງປະກອບຍ່ອຍ) ແລະໂດເມນການພົວພັນ PAM (C) ທີ່ມີໜ້າທີ່ສອດຄ້ອງກັນ. ສະລັບສັບຊ້ອນໂປຣຕີນ CRISPR/Cas9 ຕັດລຳດັບ DNA ອອກເປັນຮູບແບບທີ່ບໍ່ສົມບູນ ແລະ ຮູບແບບທີ່ສົມບູນ (D). CRISPR/Cas9 ແກ້ໄຂຈີໂນມໃນສາມຂັ້ນຕອນຄື: ການຮັບຮູ້, ການຕັດ ແລະ ການສ້ອມແປງ. sg-RNA ທີ່ອອກແບບນຳພາ Cas9 ແລະ ຮັບຮູ້ລຳດັບທີ່ຕ້ອງການຜ່ານອົງປະກອບທີ່ສົມບູນ crRNA. Cas9 ຮັບຮູ້ລຳດັບ PAM ທີ່ 5′-NGG-3′ ແລະ ລະລາຍ DNA, ສ້າງເປັນ DNA-RNA hybrid ແລະ ກະຕຸ້ນການຕັດ. ໂດເມນ HNH ຂອງ Cas9 ຕັດສາຍເສີມ, ແລະໂດເມນ RuvC ຕັດສາຍທີ່ບໍ່ເສີມ. CRISPR/Cas9 ສ້ອມແປງ dsDNA ໂດຍການທຳລາຍມັນໃນສອງວິທີຄື: ການເຊື່ອມຕໍ່ປາຍທີ່ບໍ່ຄ້າຍຄືກັນ (NHEJ) ແລະ ການສ້ອມແປງທີ່ມຸ່ງໄປສູ່ຄວາມຄ້າຍຄືກັນ (HDR). NHEJ ສ້ອມແປງ DNA ສາຍຄູ່ໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີ DNA ທີ່ຄ້າຍຄືກັນຕ່າງປະເທດຜ່ານຂະບວນການຂອງເອນໄຊມ໌, ເຊິ່ງເປັນກົນໄກທີ່ມັກຈະເກີດຄວາມຜິດພາດທີ່ສາມາດໃສ່ ຫຼື ລຶບລຳດັບ DNA ແບບສຸ່ມໄດ້. HDR ແມ່ນມີຄວາມຈຳເພາະຫຼາຍ ແລະ ຕ້ອງການແມ່ແບບ DNA ທີ່ຄ້າຍຄືກັນ.
ເສັ້ນທາງການສ້ອມແປງທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ CRISPR/Cas9 ປະກອບມີກົນໄກການເຊື່ອມຕໍ່ປາຍທີ່ບໍ່ແມ່ນ homologous (NHEJ) ແລະກົນໄກການສ້ອມແປງທີ່ມຸ່ງໄປສູ່ homology (HDR). NHEJ ເປັນເສັ້ນທາງທີ່ມີຄວາມຜິດພາດໄດ້ງ່າຍເພາະມັນກ່ຽວຂ້ອງກັບການໃສ່ ຫຼື ການລຶບ ແລະບໍ່ຕ້ອງການຮູບແບບໃດໆໃນລະຫວ່າງກົນໄກການສ້ອມແປງ. ມັນໃຊ້ນິວຄລີໂອໄທດ໌ແບບສຸ່ມເພື່ອສ້າງໂປຣຕີນມາດຕະຖານ (Abbasi et al., 2021). ລະບົບການສ້ອມແປງນີ້ປະກອບດ້ວຍສີ່ສະລັບສັບຊ້ອນເຊັ່ນ: ສະລັບສັບຊ້ອນ KU, ສະລັບສັບຊ້ອນໂປຣຕີນ cross-complementing ປະເພດ 4 (XRCC-4), ເອນໄຊປະມວນຜົນ DNA end, ແລະໂປຣຕີນ kinase DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021). ໂປຣຕີນສະລັບສັບຊ້ອນ KU ມີສອງໜ່ວຍຍ່ອຍຄື Ku 70 ແລະ Ku 80, ແລະມີບົດບາດສຳຄັນໃນກົນໄກ NHEJ, ເນື່ອງຈາກກົນໄກການສ້ອມແປງໄດ້ເລີ່ມຕົ້ນໂດຍການຜູກມັດຂອງສອງໜ່ວຍຍ່ອຍ (Ku 70 ແລະ Ku 80) ກັບປາຍທີ່ທື້ນ ຫຼື ເກືອບທື້ນຂອງ DNA ເປົ້າໝາຍ (Abbasi et al., 2021), ເຮັດໜ້າທີ່ເປັນພື້ນຖານໃນການຮັບເອົາປັດໄຈອື່ນໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ NHEJ ໄປຍັງບໍລິເວນທີ່ໄດ້ຮັບບາດເຈັບ (Yang et al., 2020). XRCC-4 ແລະ DNA ligase ປະກອບດ້ວຍກົດອະມິໂນ 334 ແລະ 911 ຕາມລຳດັບ, ແລະສະລັບສັບຊ້ອນ XRCC4-DNA ligase IV ກະຕຸ້ນການເຊື່ອມຕໍ່ຂອງປາຍ DNA (Chatterjee et al., 2015). ເອນໄຊປະມວນຜົນ DNA, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ polynucleotide kinase 3′-phosphate, ເປັນເອນໄຊປະມວນຜົນ DNA. ມັນສາມາດກຳຈັດກຸ່ມ 3′P ໃນ DNA ແລະ phosphorylate ກຸ່ມ 5′OH ໃນລະຫວ່າງການສ້ອມແປງ DSB. ມັນຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບການສ້ອມແປງການແຕກຫັກຂອງສາຍດ່ຽວ (SSBs) ໂດຍໃຊ້ເສັ້ນທາງການສ້ອມແປງ SSB (Chatterjee et al., 2015). ໂປຣຕີນໄຄເນສ DNA-PKcs ແມ່ນໂປຣຕີນໄຄເນສທີ່ຂຶ້ນກັບ DNA ເຊິ່ງປະກອບດ້ວຍໜ່ວຍຍ່ອຍ catalytic ຂອງ PIKKs (phosphatidylinositol 3-kinase-related kinases) ແລະຄອບຄົວ ataxia telangiectasia mutated (ATM), ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ ATM ແລະ ATRs ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ Rad3. ການແຕກຫັກຂອງສາຍ (DSBs) ແລະ ການແຕກຫັກຂອງສາຍດ່ຽວ (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
HDR ເປັນກົນໄກການສ້ອມແປງທີ່ຖືກຕ້ອງ ແລະ ເໝາະສົມກວ່າ ເພາະວ່າຂໍ້ມູນຖືກຄັດລອກໂດຍໃຊ້ຮູບແບບທີ່ຄົບຖ້ວນຂອງ DNA duplex ທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ເຖິງແມ່ນວ່າມັນຕ້ອງການມີໂຄຣມາທິດເອື້ອຍນ້ອງ. ສິ່ງນີ້ເກີດຂຶ້ນໃນໄລຍະ S/G2 ຂອງວົງຈອນຈຸລັງຂອງສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມແມ່. HDR ສ່ວນໃຫຍ່ເກີດຂຶ້ນໃນຊະນິດຂອງເຊື້ອລາ, ແຕ່ NHEJ ມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍໃນສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມແມ່ (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021). ກົນໄກການສ້ອມແປງທີ່ສົມບູນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1.
ເນື່ອງຈາກ TNBC ເກີດຈາກຄວາມຜິດປົກກະຕິທາງພັນທຸກໍາ ແລະ ທາງ epigenetic, ການແກ້ໄຂບັນຫາຄວາມຜິດປົກກະຕິທາງ genomic/epigenomic ທີ່ຮ້າຍແຮງໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນວິທີການປິ່ນປົວທີ່ສົມເຫດສົມຜົນ (Chen et al., 2019). ນອກຈາກນັ້ນ, ປັດໄຈການຖອດລະຫັດບາງຢ່າງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຄວບຄຸມການຖອດລະຫັດສະເພາະຂອງຈຸລັງອາດສະແດງລັກສະນະທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງຈຸລັງມະເຮັງ, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການຄວບຄຸມການຖອດລະຫັດອາດເປັນວິທີການທີ່ດີເລີດສໍາລັບການປິ່ນປົວມະເຮັງ (Drost et al., 2017). ການນຳໃຊ້ລັກສະນະໂມເລກຸນເຫຼົ່ານີ້ຂອງເນື້ອງອກ, ເຊັ່ນ: ຂໍ້ບົກຜ່ອງທາງພັນທຸກໍາ, ທາງ epigenetic ແລະ ການຖອດລະຫັດ, ສໍາລັບການພັດທະນາຢາສາມາດປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບທາງດ້ານຄລີນິກ ແລະ ຫຼຸດຜ່ອນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການກວດ. CRISPR ເປັນເຄື່ອງມືແກ້ໄຂ gene ທີ່ມີທ່າແຮງທີ່ບໍ່ພຽງແຕ່ສາມາດກວດພົບ ແລະ ລະບຸເປົ້າໝາຍ genomic ທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດມະເຮັງເທົ່ານັ້ນ, ແຕ່ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອແກ້ໄຂ, ສະກັດກັ້ນ, ແລະ ດັດແປງ oncogenes ທາງ epigenetic ໃນຈຸລັງຂອງມະນຸດ (ຕາຕະລາງທີ 1) (Ahmed et al., 2021). ການກວດສອບ CRISPR ຫຼາຍຄັ້ງໄດ້ຖືກດໍາເນີນການເພື່ອຊອກຫາ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຕົວສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກ, oncogenes, ແລະ ການຕ້ານທານຢາ. ການນໍາໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເພື່ອແກ້ໄຂ oncogenes TNBC ຕ່າງໆແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2.
ຮູບທີ 2. ການແກ້ໄຂພັນທຸກໍາຂອງ oncogenes TNBC ຕ່າງໆໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກຫຼຸດລົງ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງ. oncogenes ເຫຼົ່ານີ້ລວມມີ CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 ແລະ CXCR7, Crypto1, ROR1 ແລະ ST8SIA, ເຊິ່ງມີສ່ວນຮ່ວມໃນການເກີດຂຶ້ນ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງ TNBC.
ການເຄື່ອນຍ້າຍຂອງຈຸລັງມະເຮັງ, ການບຸກລຸກ, ແລະ ການຫັນປ່ຽນ epithelial-mesenchymal (EMT) ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບ ITGA9. ການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ ITGA9 ເປັນຜູ້ຫຼິ້ນທີ່ສຳຄັນໃນເສັ້ນທາງ Notch ແລະ ມີບົດບາດທີ່ໜ້າສົນໃຈໃນການແຜ່ກະຈາຍຂອງ rhabdomyosarcoma (Molist et al., 2020). ນອກຈາກນັ້ນ, ITGA9 ຍັງພົບວ່າມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບການຄາດຄະເນຂອງຄົນເຈັບໃນເນື້ອງອກຫຼາຍຊະນິດ, ລວມທັງມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Wang Z. et al., 2019). ນອກຈາກນັ້ນ, ການວິເຄາະຊີວະຂໍ້ມູນຂ່າວສານຂອງ ITGA9 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການສະແດງອອກຂອງມັນໃນ TNBC ແມ່ນສູງກວ່າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍກ່ວາໃນມະເຮັງເຕົ້ານົມຊະນິດອື່ນໆ. ລະດັບ ITGA9 ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການແຜ່ກະຈາຍຂອງເນື້ອງອກ ແລະ ການເກີດຂຶ້ນຊ້ຳອີກໃນຄົນເຈັບ TNBC. ການລົບລ້າງ ITGA9 ໂດຍ CRISPR/Cas9 ເຮັດໃຫ້ມີຄຸນສົມບັດຄ້າຍຄືຈຸລັງລຳຕົ້ນມະເຮັງ (CSC), angiogenesis ຂອງເນື້ອງອກ, ການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກ, ແລະ ການຫຼຸດຜ່ອນການແຜ່ກະຈາຍຂອງເນື້ອງອກໂດຍການສົ່ງເສີມການເສື່ອມສະພາບຂອງ β-catenin ໃນ TNBC (Wang Z. et al., 2019).
Crypto-1 ແມ່ນສະມາຊິກຂອງຄອບຄົວ TGF-β ແລະ ມີຄວາມສຳຄັນຕໍ່ການສ້າງຕົວອ່ອນໃນໄລຍະຕົ້ນ, ການຮັກສາຈຸລັງລຳຕົ້ນ, ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງ (Ishii et al., 2021). ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ Tdgf-1, ມັນເປັນໂປຣຕີນສັນຍານ GPI ທີ່ສ້າງເປັນ oncogenic ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຄວບຄຸມການສ້າງເສັ້ນດ່າງເບື້ອງຕົ້ນ, mesoderm ແລະ endoderm, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການສ້າງຄວາມບໍ່ສົມດຸນຊ້າຍ/ຂວາໃນການພັດທະນາອະໄວຍະວະຂອງຮ່າງກາຍໃນລະຫວ່າງການສ້າງຕົວອ່ອນ (Zhang et al., 2021b). ນອກຈາກນັ້ນ, Cripto-1 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າມີສ່ວນຮ່ວມໃນການຫັນປ່ຽນ epithelial-mesenchymal (EMT) ເປັນຕົວຊີ້ບອກຈຸລັງລຳຕົ້ນ (Zhang et al., 2021b). EMT ມີຄວາມສຳຄັນບໍ່ພຽງແຕ່ສຳລັບຂະບວນການຕ່າງໆເຊັ່ນ: ການພັດທະນາຂອງຕົວອ່ອນ, fibrosis ແລະ ການຮັກສາບາດແຜ, ແຕ່ຍັງສຳລັບການບຸກລຸກຂອງມະເຮັງ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງ. ນອກຈາກນັ້ນ, Cripto-1 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າມີປະຕິກິລິຍາກັບຕົວຮັບ Notch ສີ່ຕົວ ແລະ ເສີມຂະຫຍາຍການເຕີບໂຕຫຼັງການແປຂອງພວກມັນ (Brandstadter ແລະ Maillard, 2019). ເສັ້ນທາງສັນຍານ Notch ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າມີສ່ວນຮ່ວມໃນການຮັກສາຈຸລັງມະເຮັງເຕົ້ານົມຂອງມະນຸດ. ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການລົບລ້າງ Crypto-1 ໂດຍ CRISPR/Cas9 ສະກັດກັ້ນການເຕີບໂຕຂອງມະເຮັງ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງ. ດັ່ງນັ້ນ, Crypto-1 ອາດຈະກາຍເປັນເປົ້າໝາຍການປິ່ນປົວທີ່ສຳຄັນສຳລັບ TNBC (Castro et al., 2015).
ໂປຣຕີນ XCL12 ແລະຕົວຮັບ chemokine CXC (CXCR4 ແລະ CXCR7) ຂອງມັນມີບົດບາດຫຼາຍຢ່າງໃນການຂະຫຍາຍຕົວ, ການເຕີບໂຕ, ການເຄື່ອນຍ້າຍ ແລະ ການບຸກລຸກຂອງເຊວມະເຮັງ (Wu et al., 2015). ຕົວຮັບເຄມີເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກພົວພັນກັບການພັດທະນາຂອງ TNBC ຜ່ານເສັ້ນທາງສັນຍານຫຼາຍເສັ້ນທາງທັງໃນຮູບແບບໃນຮ່າງກາຍ ແລະ ໃນຫຼອດທົດລອງ (Wu et al., 2015). ນອກຈາກນັ້ນ, ການກະຕຸ້ນຂອງ CXCR4 ແລະ CXCR7 ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ການແຜ່ກະຈາຍ ແລະ ການພະຍາກອນທີ່ບໍ່ດີໃນ TNBC (Karn et al., 2022). ດັ່ງນັ້ນ, ການລົບລ້າງ CXCR4 ແລະ CXCR7 ອາດຈະກາຍເປັນຢາທີ່ມີປະສິດຕິພາບສຳລັບການປິ່ນປົວມະເຮັງເຕົ້ານົມ, ລວມທັງ TNBC. ການສຶກສາໂດຍ Yang et al. Yang et al (2019) ໄດ້ໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເພື່ອຮ່ວມກັນລົບລ້າງເຊື້ອ CXCR4 ແລະ CXCR7 ແລະ ພົບວ່າການຂະຫຍາຍຕົວ, ການເຕີບໂຕ, ການເຄື່ອນຍ້າຍ ແລະ ການບຸກລຸກຂອງ TNBC ໄດ້ຖືກຍັບຍັ້ງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (Yang et al., 2019).
ລະດັບທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ miR-3662, ເຊິ່ງເປັນ oncogene ຂອງ TNBC, ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນເນື້ອເຍື່ອມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Yi et al., 2022). ການລົບລ້າງ miR-3662 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສາມາດຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກມະເຮັງເຕົ້ານົມ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງທັງໃນຮ່າງກາຍ ແລະ ໃນຫຼອດທົດລອງ (Agarwal ແລະ Gupta, 2021). HBP-1 ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງທີ່ມີປະສິດທິພາບຂອງສັນຍານ Wnt/-catenin ແລະ ອາດຈະເປັນສາເຫດຂອງການເຕີບໂຕຂອງຈຸລັງ TNBC ທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ miR-3662. ເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້, Yi et al. ພົບວ່າແກນ miR-3662-HBP1 ຄວບຄຸມເສັ້ນທາງສັນຍານ Wnt/-catenin ໃນຈຸລັງ TNBC (Yi et al., 2022). ເນື່ອງຈາກການສະແດງອອກສະເພາະຂອງເນື້ອງອກ, miR-3662 ອາດເປັນເປົ້າໝາຍການປິ່ນປົວທີ່ມີທ່າແຮງສຳລັບ TNBC. ດັ່ງນັ້ນ, ການລົບລ້າງ miR-3662 ທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນວິທີການທີ່ດີເລີດສຳລັບການພັດທະນາຢາໃໝ່ສຳລັບການປິ່ນປົວ TNBC.
UBR5 ເປັນໂປຣຕີນນິວຄລີໂອຟອສໂຟ ... ການຂາດ UBR5 ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ apoptosis, necrosis, ແລະ ການຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກໃນ TNBC ເນື່ອງຈາກການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ທີ່ບໍ່ດີ. ເນື່ອງຈາກການສູນເສຍ UBR5, ການແຜ່ກະຈາຍຂອງເນື້ອງອກໄປຫາອະໄວຍະວະທີ່ຢູ່ໄກຈະຫຼຸດລົງ, ແລະ UBR5 ກະຕຸ້ນ EMT ທີ່ຜິດປົກກະຕິສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນໂດຍການຫຼຸດຜ່ອນການສະແດງອອກຂອງ E-cadherin (Zhang ແລະ Weinberg, 2018). ເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້, UBR5 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເປັນປັດໄຈທີ່ສຳຄັນຫຼາຍໃນການຖອດລະຫັດ PDL1 ທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍ IFN-γ ໃນ TNBC ເນື່ອງຈາກມັນຂາດກິດຈະກຳການ ubiquitination E3. ການວິເຄາະ transcriptome RNA ເປີດເຜີຍວ່າ UBR5 ອາດມີຜົນກະທົບທາງລະບົບຕໍ່ genes ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເສັ້ນທາງ IFN-γ ແລະ ສົ່ງເສີມການ transactivation PDL1 ໂດຍການເພີ່ມລະດັບການກະຕຸ້ນຂອງ protein kinase RNA (PKR) ແລະ ຕົວປ່ຽນສັນຍານ ແລະ ຕົວກະຕຸ້ນຂອງມັນ. transcription 1 (STAT1) ແລະ interferon regulatory factor 1 (IRF1). ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການກຳຈັດ UBR5 ແລະ PD-L1 ຮ່ວມກັນໂດຍ CRISPR/Cas9 ມີຜົນກະທົບໃນການປິ່ນປົວທີ່ເຮັດວຽກຮ່ວມກັນຫຼາຍກວ່າການສະກັດກັ້ນຢ່າງດຽວ, ໂດຍມີຜົນກະທົບຢ່າງເລິກເຊິ່ງຕໍ່ສະພາບແວດລ້ອມຂອງເນື້ອງອກ (Wu et al., 2022). ດັ່ງນັ້ນ, CRISPR/Cas9 ອາດເປັນເຄື່ອງມືທີ່ສຳຄັນໃນການຍັບຍັ້ງການເຮັດວຽກຂອງ UBR5, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສະກັດກັ້ນການແຜ່ກະຈາຍຂອງ TNBC ແລະການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກ.
ROR1 ເປັນໂປຣຕີນ transmembrane ປະເພດ I ທີ່ສະແດງອອກໃນລະຫວ່າງການເປັນມະເຮັງ ແລະ ການພັດທະນາຂອງຕົວອ່ອນ ແລະ ໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນໂປຣຕີນ oncofetal (Nicholas Borcherding, 2014). ພຶດຕິກຳການຮຸກຮານຂອງມະເຮັງໃນມະນຸດຫຼາຍຊະນິດແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ ROR1. ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີໄດ້ຮັບຈາກການສຶກສາໃນຮ່າງກາຍ ແລະ ໃນຫຼອດທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບສານປະກອບການປິ່ນປົວທີ່ແນໃສ່ ROR1 (Chien et al., 2016). ລະດັບທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ mRNA ROR1 ໃນການກວດເນື້ອເຍື່ອເຕົ້ານົມຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອງອກເຕົ້ານົມຄ້າຍຄືພື້ນຖານ (BL) ທີ່ຮຸກຮານ ແລະ ການເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ສ່ວນອື່ນໆຂອງຮ່າງກາຍ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປຂອງ ROR1 ໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນຕົວຊີ້ບອກການຄາດຄະເນສຳລັບການພັດທະນາຂອງ TNBC (Chien et al., 2016). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການປິດສຽງ ROR1 ໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເພື່ອສະກັດກັ້ນການເຕີບໂຕ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງ TNBC ຈະເປັນຍຸດທະສາດທີ່ມີປະສິດທິພາບ.
ຂະບວນການ sialylation ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເພີ່ມກົດ sialic ໃສ່ glycoconjugates, ເຊິ່ງຖືກກະຕຸ້ນໂດຍ sialyltransferases (STs). ST8SIA1 ເປັນຂອງຄອບຄົວ ST ແລະມີບົດບາດສຳຄັນໃນການເກີດພະຍາດຕ່າງໆເຊັ່ນ: ມະເຮັງເລືອດຂາວ lymphocytic ແລະ ມະເຮັງລຳໄສ້ໃຫຍ່ ແລະ ທວານໜັກ (Chang et al., 2018). ການວິເຄາະລຳດັບ RNA ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ ST8SIA1 ມີການສະແດງອອກສູງໃນເນື້ອເຍື່ອເຕົ້ານົມຂອງຄົນເຈັບ TNBC ແລະ ມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງໃນທາງບວກກັບການກາຍພັນໃນ gene suppressor tumor p53, ເຊິ່ງອາດຈະປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການເກີດພະຍາດຂອງ TNBC (Battula et al., 2017). ນອກຈາກນັ້ນ, ST8SIA1 ມີສ່ວນຮ່ວມໃນການແຜ່ກະຈາຍ ແລະ ການເກີດຂຶ້ນຊ້ຳອີກຂອງ TNBC, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າມັນມີບົດບາດສຳຄັນໃນການເກີດຂຶ້ນ ແລະ ການພັດທະນາຂອງ TNBC. ໃນຮູບແບບ in vitro ຂອງ TNBC, ການລົບລ້າງ ST8SIA1 ໂດຍ CRIPSR/Cas9 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສະກັດກັ້ນການເຕີບໂຕ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍ (Battula et al., 2017). ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນເຄື່ອງມືທີ່ສຳຄັນສຳລັບການຍັບຍັ້ງການເຮັດວຽກຂອງ oncogene ST8SIA1 ໃນການປິ່ນປົວ TNBC.
NAT1 ເປັນເອນໄຊມ໌ການເຜົາຜານອາຫານທີ່ກະຕຸ້ນການສ້າງສານປະກອບ xenobiotic ໄລຍະ II ແລະສະແດງອອກໃນເນື້ອເຍື່ອຂອງມະນຸດເກືອບທັງໝົດ. NAT1 ສາມາດໃຊ້ cofactor folate ເພື່ອເປົ້າໝາຍ acetyl-CoA (acetyl-CoA) ເຖິງແມ່ນວ່າບໍ່ມີ substrate aromatic amine (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ NAT1 ຄວບຄຸມການເຮັດວຽກຂອງ matrix metalloproteinase 9 (MMP9) ໃນຮູບແບບຈຸລັງມະເຮັງເຕົ້ານົມ ແລະປົກປ້ອງຕໍ່ກັບ reactive oxygen species (ROS) ໃນລະຫວ່າງການຂາດນ້ຳຕານ (Wang et al., 2018). ການລຶບ NAT1 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຍັບຍັ້ງສະລັບສັບຊ້ອນ pyruvate dehydrogenase, ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການເຮັດວຽກຜິດປົກກະຕິຂອງ mitochondrial (Wang L. et al., 2019). ນອກຈາກນັ້ນ, ບົດລາຍງານອື່ນໆໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຍັບຍັ້ງ NAT1 ໂດຍໃຊ້ໂມເລກຸນຂະໜາດນ້ອຍ ແລະ ການປິດ siRNA ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນການບຸກລຸກ ແລະ ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Stepp et al., 2018). ເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້, CRISPR/Cas9 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສະກັດກັ້ນ NAT1 ໃນເຊວມະເຮັງເຕົ້ານົມ MDA-MB-231, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການເຜົາຜານອາຫານຂອງເຊວໂດຍອີງຕາມລະດັບການສະແດງອອກຂອງມັນ. ການສຶກສານີ້ຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ NAT-1 ແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍຕໍ່ຄວາມຄືບໜ້າ ແລະ ການແຜ່ກະຈາຍຂອງ TNBC (Carlisle et al., 2020).
ການຖອດລະຫັດທີ່ປະສານງານຂອງ oncogenes ແມ່ນຄວບຄຸມໂດຍ super enhancers, transcription factors ແລະ cofactors (Hnisz et al., 2015). ນອກຈາກນັ້ນ, ກຸ່ມຂອງ cyclin-dependent kinases (CDKs), ເຊັ່ນ CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, ແລະ CDK13, ແມ່ນຈຳເປັນສຳລັບການຄວບຄຸມ transcriptional. ໃນນັ້ນ, CDK7 ມີສ່ວນຮ່ວມໃນ phosphorylation ຂອງ RNA polymerase II, ເຊິ່ງມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍສຳລັບການເລີ່ມຕົ້ນ ແລະ ການຂະຫຍາຍ transcription oncogene ໃນການເກີດພະຍາດຂອງ TNBC. ໃນການສຶກສາທີ່ສຳຄັນ, ການລຶບ CDK7 ໂດຍ CRISPR/Cas9 ໄດ້ຍັບຍັ້ງ TNBC, ຊີ້ບອກວ່າການເກີດພະຍາດຂອງ TNBC ແມ່ນຂຶ້ນກັບ CDK7 (Wang Y. et al., 2015).
ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການກາຍພັນໃນ MYC ແລະ RBP (ໂປຣຕີນທີ່ຜູກມັດ RNA) ສາມາດນໍາໄປສູ່ການຕາຍຂອງເຊວ, ໃນຂະນະທີ່ການກາຍພັນຂອງ gene ດຽວໃນ MYC ຫຼື RBP ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງເຊວມະເຮັງ (Einstein et al., 2021). ຫຼາຍກວ່າ 1000 RBPs ໃນຈີໂນມຂອງມະນຸດໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ຫ້ອງສະໝຸດທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9. ໃນນັ້ນ, 57 RBPs ຖືກພົບວ່າມີຄວາມສໍາຄັນຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງເຊວມະເຮັງທີ່ມີລະດັບ MYC ທີ່ສູງຂຶ້ນ (Wheeler et al., 2020). ນອກຈາກນັ້ນ, YTHDF2 ມີຄວາມສໍາຄັນຕໍ່ການຮັກສາການເຕີບໂຕຂອງເຊວ TNBC ແລະຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານຂອງ transcripts methylated ໃນລະຫວ່າງການ transcription ແລະ translation ລະດັບສູງໃນເຊວມະເຮັງທີ່ມີການສະແດງອອກ MYC ທີ່ສູງຂຶ້ນ. ນອກຈາກນັ້ນ, YTHDF2 ບໍ່ຈໍາເປັນສໍາລັບເຊວມະເຮັງ, ເຊິ່ງຂຶ້ນກັບລະດັບ MYC ທີ່ສູງຂຶ້ນໜ້ອຍລົງເພື່ອຍືດອາຍຸການຢູ່ລອດຂອງຄົນເຈັບ TNBC (Einstein et al., 2021), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າມັນອາດຈະເປັນເປົ້າຫມາຍການປິ່ນປົວທີ່ມີທ່າແຮງສໍາລັບຢາທີ່ສາມາດເອົາຊະນະ TNBC ໄດ້.
ໂປຣຕີນຊິ້ງນິ້ວມື (ZNFs) ປະກອບເປັນປະມານ 1% ຂອງຈີໂນມຂອງມະນຸດທັງໝົດ. ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ ZNF ສາມາດຄວບຄຸມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງໃນມະເຮັງຕ່າງໆ, ເຊັ່ນ: ມະເຮັງຕັບ, ມະເຮັງເຕົ້ານົມ ແລະ ມະເຮັງລຳໄສ້ໃຫຍ່ ແລະ ທວານໜັກ (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). ຫ້ອງສະໝຸດທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ CRISPR knockout ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກວດກາພັນທຸກຳຕ້ານມະເຮັງຕ່າງໆ (TSGs) ໃນຈຸລັງມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Shalem et al., 2014). ນັບຕັ້ງແຕ່ນັ້ນມາ, ການສຶກສາ transcriptomic ຂອງຈຸລັງມະເຮັງເຕົ້ານົມທີ່ຖືກລຶບ ZNF319 CRISPR/Cas9 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ ZNF319 ເປັນພັນທຸກຳຕ້ານມະເຮັງທີ່ຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມ ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງມີສ່ວນຮ່ວມໃນກົນໄກການສົ່ງສັນຍານທີ່ມີທ່າແຮງຕ່າງໆ ແລະ ໜ້າທີ່ທາງຊີວະວິທະຍາອື່ນໆ (Wang L. et al., 2022).
ພະຍາດ Ferroptosis ເປັນປະເພດຂອງການຕາຍຂອງຈຸລັງທີ່ຖືກຕັ້ງໂປຣແກຣມໄວ້ ເຊິ່ງຂຶ້ນກັບການມີທາດເຫຼັກ. ເປັນທີ່ຮູ້ກັນວ່າການພັດທະນາຂອງພະຍາດ ferroptosis ແມ່ນໄດ້ຮັບອິດທິພົນຈາກການມີ lipid peroxides. ນອກຈາກນັ້ນ, PKCβII ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການຜຸພັງຂອງ lipid ໃນໄລຍະຕົ້ນ, ແລະການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ lipid peroxidation ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບ ferroptosis. ການກວດສອບຫ້ອງສະໝຸດຂອງຕົວຍັບຍັ້ງ kinase ທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ CRISPR/Cas9 ເປີດເຜີຍວ່າ PKCβII ມີສ່ວນຮ່ວມໃນຂະບວນການຂອງການຜຸພັງຂອງ lipid, ເຊິ່ງມີຄວາມສໍາຄັນຕໍ່ ferroptosis ໃນຈຸລັງ MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022). ດັ່ງນັ້ນ, ສິ່ງນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການລົບລ້າງ PKCβII ໂດຍ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນເປົ້າໝາຍຂອງ gene ສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກທີ່ມີທ່າແຮງສໍາລັບການປິ່ນປົວພະຍາດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ ferroptosis (Zhang et al., 2022).
ການດື້ຢາເຊື່ອກັນວ່າເປັນສາເຫດຂອງການເສຍຊີວິດປະມານ 90% ໃນຄົນເຈັບມະເຮັງ ແລະ ເປັນໜຶ່ງໃນສິ່ງທ້າທາຍທີ່ສຳຄັນໃນການປິ່ນປົວມະເຮັງ (Bukowski et al., 2020). ຜົນໄດ້ຮັບຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າມີຈຳນວນທີ່ພຽງພໍຂອງພັນທຸກຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການໄຫຼອອກຂອງຢາ, ການສ້ອມແປງ DNA, ການຕາຍຂອງຈຸລັງ ແລະ ເສັ້ນທາງສັນຍານຂອງຈຸລັງຕ່າງໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການດື້ຢາ (Haider et al., 2020). ໃນນັ້ນ, ພັນທຸກຳຫຼາຍພັນທຸກຳໄດ້ຖືກເປົ້າໝາຍໂດຍເຄື່ອງມື CRISPR/Cas9 ແລະ ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຄວາມຫວັງໃນການຫຼຸດຜ່ອນການດື້ຢາ ແລະ ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງການປິ່ນປົວມະເຮັງ (Vaghari-Tabari et al., 2022). ນອກຈາກນັ້ນ, ຫ້ອງສະໝຸດການກວດຫາການກຳຈັດພັນທຸກຳ CRISPR/Cas9 ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໄດ້ຖືກພົວພັນກັບການດັດແປງໜ້າທີ່ຂອງເປົ້າໝາຍພັນທຸກຳທີ່ດື້ຢາທີ່ມີທ່າແຮງ (Shalem et al., 2015). ເພື່ອກຳນົດເຊື້ອພັນທຸກໍາທີ່ຕ້ານທານ paclitaxel, ການຈັດລໍາດັບ RNA ພ້ອມກັບການກວດຫາຫ້ອງສະຫມຸດ sgRNA ທົ່ວຈີໂນມໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດເຊື້ອພັນທຸກໍາທີ່ມີຕົວເລືອກແປດຢ່າງ, ລວມທັງ histone deacetylase 9 (HDAC9), ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຕ້ານທານຢາໃນຄົນເຈັບທີ່ມີ TNBC ທີ່ເກີດຂຶ້ນຊ້ຳອີກ (B et al., 2020). ໃນການສຶກສາອື່ນ, ການສະແດງອອກທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ diserine/threonine ແລະ tyrosine protein kinase (DSTYK) ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນລະຫວ່າງການຢູ່ລອດຂອງຄົນເຈັບ TNBC ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາຕ້ານມະເຮັງ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການລົບລ້າງ DSTYK ໂດຍ CRISPR/Cas9 ໄດ້ເສີມຂະຫຍາຍ apoptosis ຂອງຈຸລັງມະເຮັງທີ່ຕ້ານທານຢາຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຫຼອດທົດລອງ (ຈຸລັງ SUM102PT ແລະຈຸລັງ MDA-MB-468) ແລະຮູບແບບ TNBC ໃນຮ່າງກາຍ (Ogbu et al., 2021).
ເຖິງແມ່ນວ່າ TNBC ມີການກະຕຸ້ນຜິດປົກກະຕິຂອງເສັ້ນທາງ MAPK, ແຕ່ຜົນກະທົບທາງດ້ານຄລີນິກຂອງການປິ່ນປົວທີ່ແນໃສ່ MEK ແມ່ນບໍ່ດີ. ການກວດສອບຫ້ອງສະໝຸດຈີໂນມ CRISPR/Cas9 ໄດ້ເປີດເຜີຍວ່າການຍັບຍັ້ງ PSMG2 (ການປະກອບໂປຣຕີໂອມ chaperone 2) ເຮັດໃຫ້ຈຸລັງ TNBC BT549 ແລະ MB468 ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບຕົວຍັບຍັ້ງ MEK AZD6244. ການລົບລ້າງ CRISPR/Cas9 ຂອງ PSMG2 ໄດ້ປ່ຽນແປງໜ້າທີ່ຂອງໂປຣຕີໂອມປົກກະຕິ, ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການແຍກສ່ວນຂອງ PDPK1 ໂດຍ autophagy, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປັບປຸງຈຸລັງເນື້ອງອກໃນຕົວແບບໜູ TNBC ທີ່ເກີດຈາກ AZD6244 (ຕົວຍັບຍັ້ງ MEK) ແລະ MG132 (ຕົວຍັບຍັ້ງໂປຣຕີໂອມ). ດັ່ງນັ້ນ, ຕົວຍັບຍັ້ງ proteasome ແລະ MAP kinase (MEK) ສາມາດຖືກນຳໃຊ້ຮ່ວມກັນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງເນື້ອງອກ (Wang X. et al., 2022).
CRISPR/Cas9 ຍັງຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດຫາການສູນເສຍໜ້າທີ່ຂອງ gene ທີ່ນໍາໄປສູ່ການຕ້ານທານ TNBC (Shu et al., 2020). Ge et al ໄດ້ອະທິບາຍກົນໄກການຕ້ານທານຢາຂອງຈຸລັງມະເຮັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ JQ1, ເຊິ່ງເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ BET bromodomain (BBDI), ໃນ TNBC. ໂດຍການໃຊ້ CRISPR/Cas9, ພວກເຂົາເຈົ້າພົບວ່າການລຶບ gene rb1 ເຮັດໃຫ້ TNBC ມີຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ຢາຕ້ານມະເຮັງ JQ1. ດັ່ງນັ້ນ, ໜ້າທີ່ຂອງ rb1 ຈຶ່ງມີຄວາມສໍາຄັນໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ຢາ JQ1 ໃນ TNBC. ພວກເຂົາເຈົ້າຍັງໄດ້ລາຍງານວ່າ paclitaxel ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ CDK4/6 kinase/microtubule, ແລະການປະສົມປະສານຂອງມັນກັບ BBDIs ເຊັ່ນ JQ1 ອາດຈະໃຫ້ການຕອບສະໜອງການປິ່ນປົວທີ່ມີຄວາມຫວັງຕໍ່ກັບ TNBC ທີ່ຕ້ານທານຢາ (Ge et al., 2020).
ພູມສັນຖານການຖອດລະຫັດຂອງ RNA ທີ່ບໍ່ມີລະຫັດຍາວ (lncRNA) ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າເປັນສາເຫດຂອງການຕ້ານທານຕໍ່ການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາ neoadjuvant ໃນ TNBC. ການສຶກສານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຖອດລະຫັດ MALAT1 lncRNA ຫ້າອັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນສະແດງອອກສູງໃນ TNBC. ນອກຈາກນັ້ນ, ການລຶບ MALAT1 ໂດຍ CRISPR/Cas9 ໄດ້ເພີ່ມຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງຈຸລັງ TNBC BT-549 ຕໍ່ກັບ paclitaxel ແລະ doxorubicin, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງບົດບາດທີ່ມີທ່າແຮງສຳລັບການຕ້ານທານ MALAT1 ໃນ TNBC (Shaath et al., 2021).
ການກາຍພັນໃນ BRCA1 (BRCA1m) ແມ່ນບໍ່ຄືກັນ ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຍາກທີ່ຈະກວດພົບ. ການແນໃສ່ PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase), ເຊິ່ງເປັນຄູ່ຮ່ວມງານສັງເຄາະທີ່ເຮັດໃຫ້ເສຍຊີວິດຂອງ BRCA1, ອາດຈະເພີ່ມຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ຢາເຄມີບຳບັດຂອງ TNBC. ການໃຊ້ CRISPR/Cas9, ການລຶບ PARP1 ໄດ້ເພີ່ມຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງຢາຕ້ານມະເຮັງເຊັ່ນ doxorubicin, gemcitabine ແລະ docetaxel ຕໍ່ກັບຈຸລັງ TNBC ທີ່ກາຍພັນ mBRCA1, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ PARP1 ຍັງມີສ່ວນຮ່ວມໃນການຕ້ານທານຢາໃນ TNBC (Vaghari-Tabari et al., 2022). . ການກາຍພັນໃນຍີນຍັບຍັ້ງເນື້ອງອກ BRCA1 ຫຼື BRCA2 ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າເພີ່ມຄວາມເປັນໄປໄດ້ໃນການເປັນມະເຮັງເຕົ້ານົມໃນຄົນ. ການປິ່ນປົວຄົນເຈັບເຫຼົ່ານີ້ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການໃຊ້ຢາຍັບຍັ້ງ PARP. ນອກຈາກນັ້ນ, ມັນໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການລົບລ້າງປັດໄຈການກູ້ນິວຄລີໂອໄທດ໌ DNPH1 ໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ສາມາດກຳຈັດນິວຄລີໂອໄທດ໌ທີ່ເປັນພິດ 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເສີມຂະຫຍາຍການຕອບສະໜອງຂອງຈຸລັງທີ່ຂາດ BRCA ຕໍ່ຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບຕົວຍັບຍັ້ງ PARP (Fugger). et al., 2021). ດັ່ງນັ້ນ, ຕົວຍັບຍັ້ງ CRISPR/Cas9 ແລະ PARP1 ອາດຈະກາຍເປັນຍຸດທະສາດການປິ່ນປົວທີ່ສຳຄັນສຳລັບ TNBC.
ຍີນ glycoprotein ທີ່ເຈາະເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ (P-gp) ແມ່ນຍີນຕ້ານທານຢາຫຼາຍຊະນິດທີ່ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວມີການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການຕ້ານທານຢາໃນປະມານ 41% ຂອງ TNBC ທັງໝົດ (Sun et al., 2020). ການໄຫຼອອກຂອງຢາທີ່ເກີດຈາກ P-gp ໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນຕົວຄວບຄຸມຫຼັກຂອງການຕ້ານທານຢາໃນມະເຮັງເຕົ້ານົມ. ຕົວຍັບຍັ້ງ P-gp ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຕໍ່ກັບຢາຕ້ານມະເຮັງໃນມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Famta et al., 2021). ດັ່ງນັ້ນ, ການລົບລ້າງ ຫຼື ການສະກັດກັ້ນຕົວຍັບຍັ້ງ P-gp ແລະ P-gp ໂດຍ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນວິທີການທີ່ສຳຄັນຫຼາຍໃນການເອົາຊະນະການຕ້ານທານຢາໃນ TNBC.
ຕົວຂົນສົ່ງເທບທີ່ຜູກມັດ ATP G2 (ABCG2) ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າເປັນສາເຫດຂອງການດື້ຢາໃນ TNBC (Palasuberniam et al., 2015), ເຖິງແມ່ນວ່າປະຈຸບັນຍັງບໍ່ມີລາຍງານກ່ຽວກັບຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງ CRISPR/Cas9 ແລະ ການປິດສຽງ ABCG2 ແລະ ການຢຸດການເຮັດວຽກຂອງ gene ສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກ. PTEN ອາດຈະເສີມຂະຫຍາຍການກະຕຸ້ນ ABCG2 (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). ດັ່ງນັ້ນ, ການໃຊ້ CRISP/Ca9 ເພື່ອກຳຈັດ ABCG2 ແລະ ການລວມມັນກັບຕົວຍັບຍັ້ງ ABCG2 ອາດເປັນການປິ່ນປົວທີ່ເໝາະສົມເພື່ອເອົາຊະນະການດື້ຢາໃນ TNBC. ຕາຕະລາງທີ 2 ກ່າວເຖິງ CRISPR/Cas9 ທີ່ແນໃສ່ gene ຕ້ານທານທັງໝົດ.
ຕາຕະລາງທີ 2. CRISPR/Cas9 ແນໃສ່ພັນທຸກໍາຕ້ານທານ TNBC ຕ່າງໆເພື່ອເຮັດໃຫ້ຈຸລັງມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ຢາຕ້ານມະເຮັງ.
ຫ້ອງສະໝຸດ CRISPR/Cas9 ແມ່ນເຄື່ອງມືທີ່ມີທ່າແຮງສຳລັບການກວດກາການກາຍພັນຂອງ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເກີດພະຍາດມະເຮັງ (Chan et al., 2022). ວິທີການກວດການີ້ກ່ຽວຂ້ອງກັບສີ່ຂັ້ນຕອນເຊັ່ນ: (ກ) ການສ້າງຫ້ອງສະໝຸດ, (ຂ) ການສົ່ງຕໍ່ lentiviral, (ຄ) ການກວດ phenotypic, ແລະ (ງ) ການວິເຄາະ gene ເປົ້າໝາຍ. ເຖິງແມ່ນວ່າ TNBC ມີການກະຕຸ້ນຜິດປົກກະຕິຂອງເສັ້ນທາງ MAPK, ແຕ່ການຄາດຄະເນທາງຄລີນິກຂອງການປິ່ນປົວແບບເປົ້າໝາຍ MEK ສຳລັບຄົນເຈັບ TNBC ທີ່ມີການກາຍພັນໃນ gene ສະກັດກັ້ນເນື້ອງອກເຊັ່ນ PTEN, RB1, ແລະ TP53 ແມ່ນບໍ່ດີຫຼາຍ.
ນອກຈາກນັ້ນ, ການກວດສອບການທຳລາຍພັນທຸກໍາໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ໄດ້ທົດສອບໂມເລກຸນທີ່ມີປະສິດທິພາບ ແລະ ຄັດເລືອກຫຼາຍທີ່ສຸດຄື dehydrocatrol, ເຊິ່ງມີຢູ່ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນສານສະກັດຈາກດອກ ແລະ ໃບຂອງກົວເຕມາລາ, ເພື່ອເຂົ້າໃຈຜົນກະທົບຂອງ dehydrocatrol ຕໍ່ MDA-MB-231. ກົນໄກຂອງຄວາມເປັນພິດຂອງຈຸລັງທີ່ເລືອກ. ຄຸນລັກສະນະຂອງລຳຕົ້ນຂອງຈຸລັງຍ່ອຍ TNBC. ການກວດສອບທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ນີ້ຍັງໄດ້ເປີດເຜີຍວ່າ HSD17B11, ເຊິ່ງເປັນພັນທຸກໍາທີ່ເຂົ້າລະຫັດ 17β-hydroxysteroid dehydrogenase ປະເພດ 11, ມີການສະແດງອອກສູງໃນຈຸລັງ MDA-MB-231 ແລະ ສົ່ງຜົນໃຫ້ dehydrofalcarinol ສະເພາະສຳລັບຈຸລັງ MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020). ດັ່ງນັ້ນ, ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການກວດສອບພັນທຸກໍາ CRISPR/Cas9 ມີທ່າແຮງອັນໃຫຍ່ຫຼວງໃນການລະບຸກົນໄກທີ່ຢູ່ເບື້ອງຫຼັງຄຸນສົມບັດຕ້ານມະເຮັງຂອງສານປະກອບທໍາມະຊາດທີ່ມີທ່າແຮງ.
ນອກຈາກນັ້ນ, ຄວາມສ່ຽງຂອງ TNBC ຕໍ່ກັບມະເຮັງໄດ້ຖືກສຶກສາໂດຍໃຊ້ການກວດ CRISPR/Cas9 ໃນຮ່າງກາຍທີ່ບໍ່ລຳອຽງທົ່ວຈີໂນມ, ເຊິ່ງສະແດງໃຫ້ເຫັນການເຊື່ອມໂຍງລະຫວ່າງເສັ້ນທາງ oncogenic ແລະ tumor suppressor. ອົງປະກອບຫຼັກຂອງເສັ້ນທາງ mTOR ແລະ Hippo ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າມີບົດບາດສຳຄັນໃນການຄວບຄຸມເນື້ອງອກໃນ TNBC. ນອກຈາກນັ້ນ, ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຍັບຍັ້ງທາງດ້ານການຢາຂອງ mTORC1/2 ແລະ YAP oncoprotein ຍັບຍັ້ງການເກີດພະຍາດຂອງ TNBC ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບໂດຍໃຊ້ຮູບແບບການຮ່ວມມືກັນຂອງຢາໃນຫຼອດທົດລອງ ແລະ xenografts ທີ່ໄດ້ມາຈາກຄົນເຈັບໃນຮ່າງກາຍ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການຍັບຍັ້ງ mTORC1/2 ທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ Torin-1 ເສີມຂະຫຍາຍ macropinocytosis, ໃນຂະນະທີ່ການຍັບຍັ້ງ YAP ທີ່ເກີດຈາກ verteporfin ນຳໄປສູ່ການຕາຍຂອງເຊວ TNBC. ເມື່ອພິຈາລະນາຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ເນັ້ນໃຫ້ເຫັນເຖິງພະລັງ ແລະ ຄວາມແຂງແຮງຂອງການກວດ CRISPR ໃນຮ່າງກາຍທົ່ວຈີໂນມເພື່ອລະບຸການປິ່ນປົວແບບໃໝ່ ແລະ ມີປະສິດທິພາບສຳລັບ TNBC (Dai et al., 2021).
ການຄວບຄຸມລະບົບພູມຄຸ້ມກັນຜິດປົກກະຕິແມ່ນປັດໄຈສຳຄັນໃນການເກີດເນື້ອງອກ. ຈຸລັງມະເຮັງຫຼີກລ່ຽງການກຳຈັດພູມຕ້ານທານໂດຍການຫຼີກລ່ຽງກົນໄກການປ້ອງກັນ, ລວມທັງການແຊກແຊງກິດຈະກຳຂອງຈຸລັງພູມຄຸ້ມກັນໃນສະພາບແວດລ້ອມຂອງເນື້ອງອກ ແລະ ເຮັດໃຫ້ລະບົບພູມຄຸ້ມກັນເສຍຫາຍ. ດັ່ງນັ້ນ, ການພັດທະນາລະບົບພູມຄຸ້ມກັນທີ່ດີຂຶ້ນອາດເປັນວິທີການທີ່ສຳຄັນໃນການຕໍ່ສູ້ກັບເນື້ອງອກ. ການນໍາໃຊ້ການດັດແປງພັນທຸກໍາທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ແກ້ໄຂບັນຫາຕ່າງໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເຮັດວຽກຜິດປົກກະຕິຂອງພູມຕ້ານທານຈາກມຸມມອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. CRISPR/Cas9 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປັບປຸງພູມຄຸ້ມກັນຕ້ານມະເຮັງເຕົ້ານົມຜ່ານເສັ້ນທາງຕໍ່ໄປນີ້ (ຮູບທີ 3).
ຮູບທີ 3. ການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານ CRISPR/Cas9 ແມ່ນແນໃສ່ຈຸລັງ TNBC. ການສູນເສຍ CDK5 ແລະ ການຫຼຸດລະດັບຂອງ PDL1 ແລະ CD155 ຊ່ວຍເສີມສ້າງລະບົບພູມຕ້ານທານ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການສູນເສຍ A2AR ແລະ ການຫຼຸດລະດັບຂອງ TAAs ເຊັ່ນ HER2, mucin 1 ແລະ TEM8 ຊ່ວຍເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງຈຸລັງ CAR-T ໃນການຂ້າຈຸລັງມະເຮັງ. ການກວດຫາຈຸລັງ T ທີ່ຂັບເຄື່ອນດ້ວຍ CRISPR/Cas9 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການລົບກວນຂອງ p38 kinase ຊ່ວຍເສີມສ້າງກິດຈະກຳຕ້ານເນື້ອງອກຂອງຈຸລັງ T. ຈຸລັງ T ທີ່ຖືກດັດແປງໂດຍ CRISPR/Cas9 ເພີ່ມການສະແດງອອກຂອງ TCR (ຕົວຮັບຈຸລັງ T), ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ຈຸລັງ T ມີກິດຈະກຳຕ້ານເນື້ອງອກ.
ເປົ້າໝາຍຂອງການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານແມ່ນເພື່ອກະຕຸ້ນລະບົບພູມຕ້ານທານໃຫ້ໂຈມຕີຈຸລັງມະເຮັງ. ການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປຂອງໂປຣຕີນຈຸດກວດພູມຕ້ານທານມັກຈະປ້ອງກັນປະຕິກິລິຍາພູມຕ້ານທານຕົນເອງ ແຕ່ອາດຈະຊ່ວຍໃຫ້ມະເຮັງຫຼີກລ່ຽງພວກມັນໄດ້ (Topalian et al., 2015). ໂປຣຕີນເຫຼົ່ານີ້ປ້ອງກັນປະຕິກິລິຍາພູມຕ້ານທານໂດຍການຜູກມັດກັບຕົວຮັບຢູ່ເທິງໜ້າດິນຂອງຈຸລັງພູມຕ້ານທານ. ໂປຣຕີນຈຸດກວດຫຼາຍອັນ (ເຊັ່ນ CD155 ແລະ PD-L1) ແນໃສ່ຕົວຮັບ PD-1 ໃນຈຸລັງພູມຕ້ານທານ ແລະ ຖືກສະແດງອອກໃນມະເຮັງເຕົ້ານົມ, ໂດຍສະເພາະ TNBC (Li Y.-C. et al., 2020). ການລົບລ້າງ PD-L1 ຫຼື ຕົວຮັບຂອງມັນໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ສາມາດກະຕຸ້ນລະບົບພູມຕ້ານທານໃຫ້ໂຈມຕີເນື້ອງອກ TNBC (Yahata et al., 2019). ນອກຈາກນັ້ນ, ການຫຼຸດການສະແດງອອກຂອງ PD-L1 ຜ່ານການລຶບ CDK5 ໂດຍ CRISPR/Cas9 ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກໃນຫຼອດທົດລອງ ແລະ ໃນຮ່າງກາຍ (Deng et al., 2020). ການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕໃນຮູບແບບ in vitro ແລະ in vivo ຂອງມະເຮັງເຕົ້ານົມຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການຫຼຸດຜ່ອນ CD155 ໂດຍ shRNA ອາດມີຜົນກະທົບທາງການປິ່ນປົວຕໍ່ມະເຮັງເຕົ້ານົມ (Gao et al., 2018).
ຈຸລັງ CAR T ສະແດງ CARs ທີ່ຮັບຮູ້ແອນຕິເຈນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອງອກ (TAAs) ແລະສາມາດໃຊ້ການລົບລ້າງໂປຣຕີນຈຸດກວດສອບເພື່ອເສີມຂະຫຍາຍກິດຈະກຳຂອງມັນ (Li C. et al., 2020). ມີເປົ້າໝາຍທີ່ມີທ່າແຮງຫຼາຍຢ່າງສຳລັບການປິ່ນປົວດ້ວຍຈຸລັງ CAR T ໃນມະເຮັງເຕົ້ານົມ, ລວມທັງ TAAs ຫຼາຍໆຊະນິດເຊັ່ນ HER2, mucin1, ແລະ TEM8 (Bajgain et al., 2018). ມີຫຼັກຖານວ່າຈຸລັງ CAR T ທີ່ແນໃສ່ mesothelin (ສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປໃນຈຸລັງ TNBC BT-459) ມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກວ່າຕໍ່ກັບມະເຮັງເມື່ອ PD-1 ຖືກລົບລ້າງໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການແຍກຈຸລັງ T ຈາກຄົນເຈັບ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນແກ້ໄຂພວກມັນ ex vivo ແມ່ນຂະບວນການທີ່ໃຊ້ແຮງງານຫຼາຍ ແລະ ໃຊ້ເວລາຫຼາຍ. ເຖິງແມ່ນວ່າຈຸລັງ T ທົ່ວໄປສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຕ້ອງການການແຍກ, ຈຸລັງ T ຜູ້ໃຫ້ທີ່ສະແດງອອກແອນຕິເຈນເມັດເລືອດຂາວຂອງມະນຸດ (HLA) ຊັ້ນ I ແລະ ຕົວຮັບຈຸລັງ T (TCR) ຄວນຖືກກຳຈັດອອກເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມຜິດປົກກະຕິຂອງການຕໍ່ເນື້ອງອກທຽບກັບເຈົ້າພາບ (Ren et al., 2017). , 2017a). ໂດຍການໃຊ້ CRISPR/Cas9, HDR ສາມາດກຳຈັດ TCR ແລະ HLA ໄດ້ພ້ອມໆກັນ ແລະ ເຮັດໃຫ້ CAR ທີ່ເຂົ້າລະຫັດ gene ໝົດໄປ. ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ CRISPR/Cas9 ສາມາດນຳໃຊ້ເພື່ອນຳເອົາ anti-CD19 CARs ເຂົ້າໄປໃນ locus TCR, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຜະລິດ CARs ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບໂດຍບໍ່ເຮັດໃຫ້ຈຸລັງ T ໝົດໄປ (Dimitri et al., 2022). ເຕັກໂນໂລຊີ Multiplex ໄດ້ຖືກພັດທະນາເພື່ອສ້າງຈຸລັງ CAR T allogeneic ໂດຍການກຳຈັດ TCR, beta-2-microglobulin (B2M), HLA-I subunit ແລະໂປຣຕີນອື່ນໆເຊັ່ນ PD-1 ແລະ CTLA-4, ເຊິ່ງອາດມີຄຸນສົມບັດຕ້ານມະເຮັງຫຼາຍກວ່າຕໍ່ຕ້ານ TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
ການໃຊ້ CRISPR/Cas9 ສາມາດປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງຈຸລັງ CAR-T. Adenosine ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າມີຄຸນສົມບັດສະກັດກັ້ນພູມຕ້ານທານ ແລະ ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນພູມຕ້ານທານຕ້ານມະເຮັງໂດຍການສະກັດກັ້ນການເຮັດວຽກຂອງຈຸລັງ T ແລະ ກະຕຸ້ນຕົວຮັບ adenosine A2A (A2AR) (Vigano et al., 2019). ການປິດກັ້ນ A2AR ໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ໄດ້ປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງຈຸລັງ CAR-T ໃນຮ່າງກາຍຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (Giuffrida et al., 2021). ຈຸລັງ T ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າສະແດງລັກສະນະ phenotypic ຕ່າງໆເຊັ່ນ: ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ, ການຈຳແນກ, ຄວາມກົດດັນທາງອົກຊີເດຊັນ ແລະ ຄວາມກົດດັນທາງພັນທຸກໍາ. ການກວດຫາຈຸລັງ T ທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ເປີດເຜີຍການລົບກວນຂອງ 25 ຕົວຮັບຈຸລັງ T ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ໃນນັ້ນ, ການລຶບ p38 kinase ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເສີມຂະຫຍາຍກິດຈະກໍາຕ້ານເນື້ອງອກຂອງຈຸລັງ T, ຊີ້ບອກວ່າ p38 kinase ເປັນຕົວຄວບຄຸມທີ່ສໍາຄັນຂອງການຄວບຄຸມຈຸລັງ CAR-T (Gurusamy et al., 2020).
ຈຸລັງ T ສາມາດດັດແປງພັນທຸກໍາໄດ້ໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເພື່ອຜະລິດ TCR ທີ່ສະແດງອອກສູງ. ການໂອນຈຸລັງ T ທີ່ດັດແປງພັນທຸກໍາໄປຫາຄົນເຈັບໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນກິດຈະກໍາຕ້ານມະເຮັງທີ່ເຂັ້ມແຂງກວ່າຈຸລັງ T ພາຍໃນ. ດັ່ງນັ້ນ, TCR ພາຍໃນອາດຈະແຂ່ງຂັນກັບ TCR ທີ່ດັດແປງພັນທຸກໍາໃນຄົນເຈັບ, ເຊິ່ງອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ທ່າແຮງຂອງການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານມະເຮັງ. ເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫານີ້, ການໃຊ້ CRISPR/Cas9 ເພື່ອກໍາຈັດ TCR-β ພາຍໃນໃນຈຸລັງຜູ້ຮັບ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນໂອນຈຸລັງ T TCR-β ໄປຫາຄົນເຈັບມະເຮັງອາດຈະສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການຕອບສະໜອງພູມຕ້ານທານຕ້ານມະເຮັງທີ່ດີຂຶ້ນໂດຍບໍ່ຕ້ອງມີການແຂ່ງຂັນທາງເພດ TCR ພາຍໃນ (Fan et al. 2018). ດັ່ງນັ້ນ, ຍົກເວັ້ນຈຸລັງ T ທີ່ດັດແປງ CRISPR, TCR ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບແອນຕິເຈນຂອງເນື້ອງອກຫຼາຍກວ່າຈຸລັງ T ທີ່ປ່ຽນ TCR ປົກກະຕິເຖິງພັນເທົ່າ. ນອກຈາກນັ້ນ, ໃນມະເຮັງເລືອດຫຼາຍຊະນິດ, ຈຸລັງ T ທີ່ປ່ຽນແປງທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ γδ TCR+ CRISPR ສະແດງໃຫ້ເຫັນການສະແດງອອກຂອງຈຸລັງ T CD4+ ແລະ CD8+ ສູງກວ່າການໂອນ TCR ມາດຕະຖານ (Legut et al., 2018). ດັ່ງນັ້ນ, ຈຸລັງ T ທີ່ຖືກດັດແປງທີ່ຜະລິດໂດຍ CRISPR/Cas9 ອາດເປັນວິທີການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານທີ່ມີປະສິດທິພາບເພື່ອເອົາຊະນະ TNBC.
ອິນທີກຣິນ ແມ່ນໂມເລກຸນທີ່ຍຶດຕິດຈຸລັງທີ່ມີຢູ່ໃນເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງ ແລະ ສົ່ງເສີມການຜູກມັດຂອງຈຸລັງກັບເມທຣິກນອກຈຸລັງ (ECM) (Hamidi ແລະ Ivaska, 2018). ການປ່ຽນແປງຂອງອິນທີກຣິນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການພັດທະນາ ແລະ ການເຄື່ອນຍ້າຍຂອງມະເຮັງໂດຍການປ່ຽນແປງເມທຣິກນອກຈຸລັງ, ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການຢູ່ລອດຂອງຈຸລັງມະເຮັງໃນການໄຫຼວຽນ (Hamidi ແລະ Ivaska, 2018). ການລົບລ້າງອິນທີກຣິນທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍ CRISPR/Cas9 ເຮັດໃຫ້ການກ້າວໜ້າຂອງເນື້ອງອກ, ການແຜ່ກະຈາຍ, ແລະ ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງອານານິຄົມໃນ TNBC ຊ້າລົງ. ການລົບລ້າງອິນທີກຣິນ a5 (ITGA5) ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າຫຼຸດຜ່ອນການເຄື່ອນຍ້າຍ ແລະ ຄວາມຄືບໜ້າຂອງຈຸລັງໃນມະເຮັງອື່ນໆເຊັ່ນມະເຮັງປອດ (Ju et al., 2017), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອິນທີກຣິນ a5 ອາດເປັນປັດໄຈສຳຄັນໃນການເກີດພະຍາດຂອງ TNBC.
ການສ້າງໜູ knockout ໂດຍໃຊ້ວິທີການຈຸລັງລຳຕົ້ນຂອງຕົວອ່ອນ (ES) ແບບດັ້ງເດີມແມ່ນຂະບວນການທີ່ໃຊ້ແຮງງານຫຼາຍ, ໃຊ້ເວລາຫຼາຍ, ແລະ ບໍ່ມີປະສິດທິພາບ. ມັນໃຊ້ເວລາຫຼາຍເດືອນ ແລະ ຫຼາຍປີເພື່ອເປົ້າໝາຍຈຸລັງ ES ຜ່ານການປະສົມພັນທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ປັບປຸງພັນໜູທີ່ມີຄວາມຫຼາກຫຼາຍ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນປະສົມພັນກັບໜູ heterozygous ເພື່ອຜະລິດລູກຫລານທີ່ມີຄຸນລັກສະນະຄ້າຍຄືກັນ. ການປະສົມພັນທີ່ສັບສົນແມ່ນຈຳເປັນເພື່ອສ້າງໜູທີ່ມີການກາຍພັນທາງພັນທຸກຳຫຼາຍອັນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມີບັນຫາຫຼາຍຢ່າງເກີດຂຶ້ນເມື່ອໃຊ້ໜູທີ່ຜະລິດໂດຍການກຳຈັດຈຸລັງ ES ໂດຍໃຊ້ CRISPR/Cas9 ຫຼື ໂດຍການສັກຢາສ່ວນປະກອບ CRISPR/Cas9 ເຂົ້າໄປໃນໄຂ່ທີ່ປະສົມພັນໃນຈຸລັງດຽວ. ຕົວຢ່າງ, ການນຳສະເໜີການປ່ຽນແປງມັກຈະເກີດຂຶ້ນຢູ່ທີ່ loci ສອງຊັ້ນ ແລະ ບໍ່ແມ່ນສະເພາະ gene. ມີລາຍງານເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້ວ່າຈຸລັງ ES ທີ່ໃຊ້ເທັກໂນໂລຢີ CRISPR/Cas9 ສາມາດໃສ່ການກາຍພັນສອງຊັ້ນໄດ້ເຖິງ 5 gene ພ້ອມໆກັນ (Nishizono et al., 2021). ສຳລັບຈຸດປະສົງນີ້, mRNA ຂອງ Cas9 ແລະ gRNA ສະເພາະ gene ຫ້າອັນໄດ້ຖືກ transfected ພ້ອມໆກັນເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ ES. ສິ່ງນີ້ເນັ້ນໃຫ້ເຫັນເຖິງຄຳໝັ້ນສັນຍາ ແລະ ປະສິດທິພາບຂອງຂັ້ນຕອນນີ້, ເຖິງແມ່ນວ່າການກາຍພັນເຫຼົ່ານີ້ອາດຈະຖືກຖ່າຍທອດມາເມື່ອສາຍພັນຜູ້ກໍ່ຕັ້ງໄດ້ຖືກປັບປຸງພັນເພື່ອຜະລິດໜູ knockout ຫ້າໂຕ. ການສຶກສາຍັງລາຍງານການຄົ້ນພົບທີ່ໜ້າປະຫລາດໃຈ: ຈຸລັງ ES ບໍ່ຈຳເປັນຕ້ອງສ້າງໜູທີ່ຖືກດັດແປງພັນທຸກຳອີກຕໍ່ໄປ. ແທນທີ່ຈະ, ເພື່ອກຳຈັດຜະລິດຕະພັນພັນທຸກຳສະເພາະ, mRNA ແລະ gRNA ຂອງ Cas9 ໄດ້ຖືກສັກເຂົ້າໄປໃນຕົວອ່ອນໄລຍະຈຸລັງດຽວ. ດັ່ງນັ້ນ, ສາຍພັນຜູ້ກໍ່ຕັ້ງ knockout ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນເຊິ່ງສາມາດນຳໃຊ້ໃນທາງທິດສະດີເພື່ອສຶກສາຜົນສະທ້ອນຂອງການລຶບພັນທຸກຳໃນໜູ (Qin et al., 2016). ດັ່ງນັ້ນ, CRISPR/Cas9 ຊ່ວຍໃຫ້ການສ້າງໜູ transgenic ເພື່ອປິ່ນປົວ TNBC ໃນລາຄາທີ່ຕໍ່າກວ່າວິສະວະກຳທາງພັນທຸກຳແບບດັ້ງເດີມ. ໂດຍການໃຊ້ລະບົບ CRISPR/Cas, ຮູບແບບໜູ knockout ໃໝ່ໄດ້ຖືກພັດທະນາຂຶ້ນເຊິ່ງສາມາດນຳສະເໜີການກາຍພັນຈຸດໃນໜຶ່ງຫຼືຫຼາຍພັນທຸກຳພາຍໃນໃນ TNBC ໄດ້ຢ່າງສຳເລັດຜົນ. ອີງຕາມແນວຄວາມຄິດນີ້, ຮູບແບບສັດຂອງ TNBC ຍັງສາມາດພັດທະນາໄດ້ໂດຍໃຊ້ການລຶບ BRCA1 ແລະ p53 ໂດຍ CRISPR/Cas9, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ການສູນເສຍການສ້ອມແປງ HR, ຄວາມບໍ່ໝັ້ນຄົງຂອງຈີໂນມ, ແລະ phenotypes ກາຍພັນ (Annunziato et al., 2020).
ປະຈຸບັນ, ວິທີການຕ່າງໆເຊັ່ນ: ການກວດເຕົ້ານົມ, ການຖ່າຍພາບແມ່ເຫຼັກ (MRI) ແລະ ການກວດດ້ວຍຄື້ນສຽງຄວາມຖີ່ສູງ (ultrasound) ແມ່ນໃຊ້ເພື່ອກວດຫາ TNBC. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ວິທີການເຫຼົ່ານີ້ມີຂໍ້ຈຳກັດບາງຢ່າງ. ການກວດເຕົ້ານົມແມ່ນໃຊ້ເພື່ອກວດຫາເນື້ອເຍື່ອເຕົ້ານົມໃນທ້ອງຖິ່ນແທນທີ່ຈະເປັນການແຜ່ກະຈາຍຂອງມະເຮັງໄປຫາອະໄວຍະວະອື່ນໆ. ການກວດດ້ວຍຄື້ນສຽງຄວາມຖີ່ສູງ (Ultrasound) ບໍ່ແມ່ນວິທີການທີ່ໜ້າເຊື່ອຖືໃນການກວດຫາ TNBC (Chen ແລະ Lee-Felker, 2023). MRI ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງກວ່າການກວດດ້ວຍຄື້ນສຽງຄວາມຖີ່ສູງ ແລະ ການກວດດ້ວຍຄື້ນສຽງຄວາມຖີ່ສູງ, ແຕ່ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການວິນິດໄສຂອງມັນມີຈຳກັດ (Sha ແລະ Chen, 2022). ການກວດເນື້ອເຍື່ອແມ່ນວິທີການທີ່ຮຸກຮານໃນການກຳນົດຈຸລັງມະເຮັງ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນບາງກໍລະນີ, ການກວດເນື້ອເຍື່ອອາດຈະພາດເນື້ອເຍື່ອມະເຮັງຖ້າເຂັມຫຼົງອອກຈາກພື້ນທີ່ທີ່ສົນໃຈ. ນອກຈາກນັ້ນ, ມັນມີລາຄາແພງຫຼາຍ ແລະ ສາມາດເປັນອັນຕະລາຍຕໍ່ຄົນເຈັບ. TNBC ເປັນມະເຮັງປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ສະນັ້ນການກວດເນື້ອເຍື່ອອາດຈະບໍ່ໃຫ້ຂໍ້ມູນພຽງພໍກ່ຽວກັບປະເພດຂອງມະເຮັງ. ດັ່ງນັ້ນ, ວິທີການກວດຫາ TNBC ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃໝ່ແມ່ນມີຄວາມຈຳເປັນຢ່າງຮີບດ່ວນ. CRISPR/Cas9 ອາດເປັນທາງເລືອກທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ ແລະ ມີການຮຸກຮານໜ້ອຍທີ່ສຸດສຳລັບການວິນິດໄສມະເຮັງເຕົ້ານົມ. ດ້ວຍເຫດນີ້, ຍຸດທະສາດທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ສາມາດນຳໃຊ້ເພື່ອປັບປຸງວິທີການ PCR ສຳລັບການວິນິດໄສ TNBC. ກ່ອນອື່ນໝົດ, ໂປຣຕີນ Cas9 ແລະ cpf1 ຂອງລະບົບ CRISPR ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກຳຈັດ DNA ທີ່ບໍ່ຈຳເພາະເຈາະຈົງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໂປຣຕີນສອງຊະນິດນີ້ (Cas9 ແລະ cpf1) ສາມາດຮັບຮູ້ລຳດັບ PAM ກ່ອນທີ່ຈະຜູກມັດກັບ DNA ເປົ້າໝາຍ (Deepak Singh et al., 2021). ດັ່ງນັ້ນ, PCR ສາມາດລະບຸການກາຍພັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການພັດທະນາຂອງມະເຮັງ. ການສຶກສາຫຼາຍໆຄັ້ງໄດ້ຮັບຮອງເອົາຍຸດທະສາດທີ່ອີງໃສ່ CRISPR ນີ້ເພື່ອກວດຫາການກາຍພັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນມະເຮັງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (Safari et al., 2019). ດັ່ງນັ້ນ, ວິທີການ PCR ທີ່ອີງໃສ່ CRISPR ອາດຈະຫຼຸດຜ່ອນການເພິ່ງພາອາໄສການວິນິດໄສ TNBC ກ່ຽວກັບວິທີການຮຸກຮານເຊັ່ນ: immunohistochemistry ທີ່ອີງໃສ່ການກວດເນື້ອເຍື່ອ.
ການປ່ຽນແປງທາງດ້ານ genotypic ໃນການຄວບຄຸມຕົວຮັບຮໍໂມນຍັງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນ TNBC (Chen ແລະ Russo, 2009). ຍຸດທະສາດ PCR ທີ່ອີງໃສ່ CRISPR/Cas9 ໂດຍໃຊ້ microarrays ສຳລັບການວິນິດໄສຈຸດດູແລສາມາດຕິດຕາມກວດກາການກາຍພັນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ (Hajian et al., 2019). ມັນຍັງສາມາດໃຫ້ຂໍ້ມູນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງແກ່ຜູ້ໃຫ້ບໍລິການດ້ານສຸຂະພາບກ່ຽວກັບການກາຍພັນສະເພາະໃນຄົນເຈັບ TNBC, ເຊິ່ງສາມາດຊ່ວຍປັບປຸງການປິ່ນປົວຂອງເຂົາເຈົ້າ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເຕັກນິກລວມນີ້ມີຂໍ້ຈຳກັດ. ດັ່ງນັ້ນ, ຕ້ອງມີຄວາມພະຍາຍາມໃນການຄົ້ນຄວ້າຢ່າງກວ້າງຂວາງກ່ອນທີ່ວິທີການ CRISPR/Cas-PCR ນີ້ສາມາດຖືກນຳໃຊ້ໃນການດູແລສຸຂະພາບສຳລັບການວິນິດໄສ TNBC (Yang et al., 2019).
ເວລາໂພສ: ຕຸລາ-14-2024